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家蚕核型多角体病毒的多角体蛋白具有高效表达且只在碱性条件（pH10.8及以上）下可溶的特殊性质，因此，可将目的蛋白与其融合表达，一方面能提高目的蛋白的表达量，另一方面，通过简单的pH梯度洗脱和差速离心的方法就可以获得较纯的融合蛋白，再经过特异性蛋白酶酶切消化，回收得到较纯的目的蛋白。但是，目前采用多角体融合外源蛋白表达时，由于多角体融合蛋白同样需要在碱性条件下才可溶解，而在用蛋白酶进行酶切融合蛋白而获得单独的目的蛋白的过程中，由于蛋白酶反应的最适合的pH值一般是中性（pH7-9），就造成了酶切效率低，纯目的蛋白回收率低。本实验试图通过多角体蛋白部分多肽融合外源蛋白EGFP的表达，找到多角体高效表达的主要区域，并探索是否能降低融合蛋白的溶解的pH值，为进一步纯化其他的目的蛋白提供更为便利的条件。我们根据预测的多角体三级结构，分别截取了不同长度的多角体基因片段，在表达载体pET-28a上构建重组载体，然后与报告基因EGFP融合表达后，得到三种高效表达的融合蛋白Ph60-EGFP、Ph120-EGFP、Ph180-EGFP，这三种蛋白有着和多角体蛋白一样在碱性条件下（pH10.8及以上）下可溶的特殊性质，也可以通过简单的pH梯度洗脱和差速离心的方法纯化。而且还可以通过回调pH的方法使融合蛋白在中性条件下溶解，凝血酶酶切融合蛋白也较为完全。我们利用得到的这三种多角体片段融合另外两种膜蛋白MMGT和ABP在表达载体pET-28a上表达，与未融合多角体片段的外源蛋白相比，融合蛋白得到高效表达，并且也可以通过回调pH使得融合蛋白在中性条件下可溶。通过验证实验，我们证实了所得到的三种多角体片段具有高效表达的性质，且具有比全长多角体更为优越的溶解特性。这一发现，可以为大量纯化外源蛋白提供一种便捷的方法。本课题还在RNA水平上进行多角体基因转录水平的研究，利用重组好的病毒（融合ph基因和未融合ph基因的成对重组病毒），分别感染家蚕细胞；细胞发病后，加入Actinomycin D进行抑制基因转录后，分时段提取细胞和病毒的总RNA；通过荧光定量PCR检测各个时间点外源基因的mRNA的含量；统计分析数据，得出重组基因mRNA的半衰期，探索mRNA的半衰期与高效表达的关系：在选择的高效表达的成对重组病毒中，融合多角体基因后有的外源基因mRNA的含量增加，有的外源基因mRNA的半衰期得到延长，但不论mRNA含量还是半衰期，都少于野生多角体基因的mRNA含量和半衰期。这可能是由于表达系统中的环境因素对多角体mRNA自身的稳定性有很大的帮助。融合多角体基因后，外源基因的mRNA稳定性得到保护或者翻译得到多角体翻译的带动，从而也得到高效表达，具体如何导致高效表达以及更为细致的内在机制，还有待进一步研究。