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青砖茶是我国黑茶类的代表产品之一,主要产于湖北的咸宁地区,已有近一百多年历史。由于青砖茶采用独特的原料和加工工艺,使其具有生津止渴、提神醒脑、帮助消化、降脂减肥、杀菌止泻等多种保健功效,是内蒙等西北高寒高脂饮食地区人们不可或缺的饮品。目前有关青砖茶的减肥降脂功效已有相应研究,而其起作用的主要活性成分及作用机理研究较少。本试验主要研究了青砖茶水提物及其有机溶剂萃取分离组分、青砖茶乙酸乙酯层Sephadex LH-20柱层析分离组分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其动力学特征。研究了各分离组分对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用,并以EGCG为对照,研究主要活性组分对前脂肪细胞分化过程起重要作用的PPAR-γ、C/EBP-α表达量的影响。以期筛选出青砖茶中降糖降脂的主要功能性组分,并通过细胞生物学及分子生物学技术研究青砖茶降脂作用的机理。为青砖茶的开发利用提供理论依据。 1.青砖茶活性组份对α-葡萄糖苷酶作用的研究 青砖茶水提物及其有机溶剂萃取组分:乙酸乙酯层、正丁醇层、乙醇沉淀层和剩余水层对α-葡萄糖苷酶都表现出较强的抑制作用,其中乙酸乙酯层的抑制活性最强,其IC50值0.261mg/mL,远小于对照阿卡波糖IC50的4.644mg/mL。乙酸乙酯层对α-葡萄糖苷酶的抑制作用是竞争型抑制。青砖茶氯仿层则表现出对α-葡萄糖苷酶活性微弱的激活作用,并随着浓度的增大激活作用降低。 2.青砖茶乙酸乙酯层分离组分对α-葡萄糖苷酶作用的研究 乙酸乙酯层经Sephadex LH-20分离纯化得到QEF1-QEF88个组分,其中QEF1-QEF4的4个组分对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用均低于对照阿卡波糖,QEF5-QEF8的4个组分的α-葡萄糖苷酶抑制活性均强于阿卡波糖,其中QEF8的抑制作用最强,其IC50值为0.066mg/mL,强于乙酸乙酯层的抑制活性。QEF8抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用类型也是竞争型抑制。 3.青砖茶活性组份对3T3-L1前脂肪细胞的作用分析 通过青砖茶活性组份的前脂肪细胞毒性分析确定25μM、10μM作为研究细胞分化作用的浓度条件。青砖茶水提物、乙酸乙酯层、正丁醇层、沉淀层在25μM的浓度下抑制前脂肪细胞分化的作用强于10μM,其中乙酸乙酯层、正丁醇层表现出强烈的前脂肪细胞分化的抑制作用,细胞分化率仅为正常细胞分化率的50.48%、58.81%。青砖茶水提物、沉淀层也表现出一定的细胞分化抑制作用,水层与沉淀层对前脂肪细胞的抑制活性并不明显。 在25μM的浓度下研究QEF1-QEF8和QBF1-QBF8影响前脂肪细胞分化的分化作用,其中QEF2、QEF8都具有较强的前脂肪细胞分化抑制活力,它们的细胞分化抑制率分别达到52.66%、54.82%,QEF4的细胞分化抑制率为61.26%也表现出很好的细胞分化抑制活性。QBF组中的抑制前脂肪细胞分化的整体作用不及QEF组,只有QBF2的细胞分化抑制活性较为明显。 4.青砖茶分离组分对PPAR-γ、C/EBPα表达的影响 青砖茶乙酸乙酯萃取层能够显著降低脂肪细胞PPAR-γ和C/EBP-α基因mRNA的表达,其表达量分别降低了46%和40%,因而青砖茶乙酸乙酯层抑制前脂肪细胞分化和细胞脂质的形成可能是通过降低前脂肪细胞PPAR-γ和C/EBP-α基因的表达来实现的。EGCG也表现出抑制PPAR-γ和C/EBP-α细胞分化调节因子表达量的作用,表达量分别下降了54%和47%。