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该文以黄芩素为目标产物,旨在建立高效稳定的黄芩总黄酮提取方法和黄芩苷生物转化方法。
考察了水煎煮法、乙醇回流法、乙醇室温浸提法对黄芩总黄酮收率和纯度的影响,结果表明乙醇室温浸提法明显优于其它两种方法。确定乙醇室温浸提法的工艺条件为:50%乙醇室温浸提3次,每次24h;酸沉温度40℃;酸沉pH为0.5。平行试验显示,该工艺稳定性好,黄芩总黄酮的平均收率为7.68%。精制后黄芩苷得率为2.56%,纯度为98.14%。
黄芩的保藏或炮制方法不当,均能造成有效成分含量的下降,究其原因是黄芩根部的β-D-葡萄糖苷酸酶能够水解黄芩苷和汉黄芩苷。用醋酸缓冲液从粘毛黄芩根中抽提出粗酶,继而用硫铵沉淀法、DEAE-celluloseDE-52离子交换法纯化了黄芩苷-β-D-葡萄糖苷酸酶。SDS-PAGE测定为电泳单点纯,相对分子质量是58.4kDa。
以黄芩苷为底物进行酶性质的研究,结果显示,黄芩苷-β-D-葡萄糖苷酸酶反应最适温度50℃,最适pH5.0;在温度低于70℃,pH在4.0~7.0之间酶活力稳定;Ca2+、Zn2+对酶活力几乎没有影响,Mg2+对酶有微弱的激活作用,而Cu2+有微弱的抑制作用,Fe3+显著抑制酶活力。上述结果对黄芩生药的保藏、黄芩炮制方法的改进具有重要意义,同时也可为酶法转化黄芩苷的可行性提供依据。
利用植物酶进行黄芩苷的生物转化成本较高,因此从自然界中筛选了能够诱导产生黄芩苷-β-D-葡萄糖苷酸酶的微生物,并确定转化条件。结果表明sp.48g菌经诱导,产酶活力最高。转化条件为:温度55℃,pH4.0,底物浓度1%,反应时间18h。黄芩苷的实际转化率为97.5%,以黄芩苷为基准,黄芩素得率为59.0%。