【摘 要】
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目的:研究发现经血源性间充质干细胞(menstrual blood-derived mesenchymal stem cells,MenSCs)可有效修复子宫内膜损伤,其作用机制尚不清楚。本文就MenSCs在修复损伤性子宫内膜过程中对IFN-γ、IL-2以及IL-6的影响进行探讨,为进一步研究MenSCs的免疫调节机制。方法:1.建立小鼠子宫内膜损伤模型。每天同一时间用生理盐水冲洗小鼠阴道取阴道分
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目的:研究发现经血源性间充质干细胞(menstrual blood-derived mesenchymal stem cells,MenSCs)可有效修复子宫内膜损伤,其作用机制尚不清楚。本文就MenSCs在修复损伤性子宫内膜过程中对IFN-γ、IL-2以及IL-6的影响进行探讨,为进一步研究MenSCs的免疫调节机制。方法:1.建立小鼠子宫内膜损伤模型。每天同一时间用生理盐水冲洗小鼠阴道取阴道分泌物,并采用HE染色方法检测,来判断动情周期。于动情期当天的下午宫腔灌注95%乙醇并滞留15 s,建立子宫内膜损伤模型。建模三个动情周期后于动情期当天的下午收集子宫组织,并通过HE染色观察子宫内膜组织形态及厚度。2.研究MenSCs修复损伤性子宫内膜的Th 1/Th 2细胞免疫调节作用。实验分为三组:正常对照组、PBS移植组及干细胞移植组。正常对照组:未建立子宫内膜损伤模型及未作任何处理,PBS移植组:小鼠宫腔灌注95%乙醇并滞留15 s后立即原位移植PBS,干细胞移植组:小鼠宫腔灌注95%乙醇并滞留15 s后立即原位移植MenSCs,并于三个动情周期后收集子宫组织,通过Western Blot及实时荧光定量PCR方法,测定三组子宫内膜组织中的干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)、IL-2以及IL-6表达量,进而了解MenSCs修复子宫内膜损伤的免疫调节机制。结果:1.小鼠动情周期检测:动情前期的阴道分泌物涂片可见大量有核上皮细胞以及少量的角化细胞,动情期涂片可见满视野角化上皮细胞以及少量的有核上皮细胞,动情后期的涂片可见少量角化上皮细胞以及白细胞,动情间期的涂片可见大量的白细胞;2.HE染色观察:子宫内膜损伤组子宫内膜明显变薄,腔上皮细胞受损甚至断裂,腺体减少,证明模型成功;3.使用Western Blot方法检验免疫因子的蛋白表达量,其中干细胞移植组IFN-γ的表达量低于PBS移植组(P<0.05),与正常对照组差异无统计学意义,而PBS移植组的表达量高于正常对照组(P<0.05)。干细胞移植组IL-2的表达量低于PBS移植组(P<0.01),仍高于正常对照组(P<0.01),PBS移植组的表达量则高于正常对照组(P<0.01)。干细胞移植组IL-6的表达量高于PBS移植组(P<0.05),而与正常对照组差异无统计学意义,PBS移植组的表达量则低于正常对照组(P<0.01);4.使用PCR方法检验免疫因子的m RNA表达情况,干细胞移植组IFN-γ的m RNA表达量低于PBS移植组(P<0.05),与正常对照组差异无统计学意义,而PBS移植组的表达量则高于正常对照组(P<0.05)。干细胞移植组IL-2的m RNA表达量低于PBS移植组(P<0.01),高于正常对照组(P<0.01),PBS移植组的表达量则高于正常对照组(P<0.001)。干细胞移植组IL-6的m RNA表达量高于PBS移植组(P<0.05),而与正常组差异无统计学意义,PBS移植组的表达量则低于正常对照组(P<0.05)。结论:1.小鼠子宫内膜经过95%乙醇损伤后促炎因子IFN-γ与IL-2高表达,呈现出以Th 1细胞为主的炎症反应,并且可能抑制了抑炎因子IL-6发挥保护机体免疫耐受的作用。2.在经过MenSCs原位移植后的小鼠则出现IL-6的高表达,以Th 2细胞为主的抗炎反应,其有利于子宫内膜修复,同样也可能抑制促炎因子IFN-γ、IL-2引起的免疫异常反应。3.MenSCs治疗后小鼠子宫内膜炎症反应仍存在,故所使用干细胞治疗剂量需进一步改善。
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