果糖基转移酶及过氧化氢酶的固定化

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本文主要研究了果糖基转移酶及过氧化氢酶的固定化,并在此基础上分别对两种固定化酶的酶学性质进行了研究。从18种离子交换树脂和吸附树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D380为载体、以戊二醛为交联剂,采用先吸附后交联的方法对果糖基转移酶的固定化进行分析,并对固定化条件进行了优化,结果表明,最佳固定化条件为:加酶量为200U/g树脂,吸附pH值为6.0,吸附时间为6h,吸附温度为30℃,交联剂戊二醛浓度为0. 01% ,交联时间为6h ,交联温度为4℃,固定化酶活回收率最高可达87.6%以上。固定化果糖基转移酶的的最适温度为50~55℃,比游离酶提高了5℃;热稳定性与游离酶基本相同;最适pH6.0比游离酶提高了一个单位;pH稳定性也稍有提高;固定化酶的Km值为0.60离酶的大;固定化酶重复使用10次后残余酶活为10%左右,固定化酶和游离酶均具有较好的贮存稳定性。以一种无载体固定化技术-交联酶聚集体技术固定化过氧化氢酶,考察了交联剂浓度、交联时间、交联温度对固定化效果的影响。优化的固定化条件为:交联剂戊二醛浓度为1%、交联温度为4℃、交联时间为4h,在此条件下可达到较好的固定化效果。固定化过氧化氢酶的最适温度为40℃,与游离酶相比提高了5℃;热稳定性比游离酶稍有提高,在25~35℃范围内保温30min后,二者都可保留90%以上的酶活;游离酶与固定化酶的最适pH相同都为8;pH稳定性也稍有提高。在低聚果糖的生产中,大量副产物葡萄糖的产生阻遏了底物的转化,可通过葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶的协调作用,消除普通低聚果糖中的葡萄糖,因此,果糖基转移酶与过氧化氢酶的固定化,为得到高纯度的低聚果糖奠定了一定基础。
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