圆锥角膜组织与正常角膜组织差异蛋白的表达及其和圆锥角膜发病关系的初步研究

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圆锥角膜(keratoconus)是一种以角膜扩张为特征,致角膜中央部向前呈圆锥形凸起,及产生高度不规则近视散光和不同视力损害的原发性疾病。若病变持续发展,最终的结果是行角膜移植术。所以探明病因及发病机制,采取有效的控制手段,是防治圆锥角膜的根本。 目的:运用比较蛋白质组学技术,比较圆锥角膜组织和正常角膜组织的差异表达蛋白,筛选出圆锥角膜特异性分子标记物,探讨其与圆锥角膜发病机制的关系。 方法:收集12例圆锥角膜组织和4例正常人角膜组织,提取角膜组织总蛋白,行固相PH梯度双向凝胶电泳,分析凝胶电泳图谱,筛选差异表达蛋白,采用基质辅助激光解吸离子化一串联飞行时间质谱(MOLDI-TOF/TOF-MS)和数据库检索对差异蛋白质进行鉴定。 结果: 1、建立了稳定性较好、分辨率高的人圆锥角膜组织和正常角膜组织的双向凝胶电泳图谱(17cm IPG胶条PH5-8); 2、圆锥角膜组织和正常角膜组织的双向电泳代表胶的蛋白点数分别为1035和1070,匹配点数为869个,匹配率为84%。选取有明显表达差异的7个蛋白质点,其中6个蛋白质点在圆锥角膜组织中表达下调,1个蛋白质点表达上调。 3、对7个差异表达蛋白质点进行MALDI-TOF/TOF-MS的鉴定,共获得7张蛋白质点的肽质量指纹图谱(PMF)及二级质谱图(MS/MS),成功鉴定出的7个蛋白质点分别为转化生长因子β诱导的细胞外基质黏附蛋白(TGFBIp/βig-h3)、Ⅵ型胶原蛋白α1链前体(collagen alpha-1(Ⅵ)chain precursor)、αA-晶体蛋白(alpha-crystallin A)、αB-晶体蛋白(alpha-crystallin B)、βB2-晶体蛋白(beta-crystallin B2)、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase)、碳酸酐酶(carbonic anhydrase),除Ⅵ型胶原蛋白α1链前体在圆锥角膜组织中表达上调外,其余6个蛋白成分在圆锥角膜组织中均表达下调。 结论:TGFBIp/βig-h3、alpha-crystallin A、beta-crystallin B2、alpha-crystallin B、glutamine synthetase,collagen alpha-1(Ⅵ) chain precursor 6种在圆锥角膜中差异表达的蛋白质成分可能与圆锥角膜发病相关。
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