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圆锥角膜(keratoconus)是一种以角膜扩张为特征,致角膜中央部向前呈圆锥形凸起,及产生高度不规则近视散光和不同视力损害的原发性疾病。若病变持续发展,最终的结果是行角膜移植术。所以探明病因及发病机制,采取有效的控制手段,是防治圆锥角膜的根本。
目的:运用比较蛋白质组学技术,比较圆锥角膜组织和正常角膜组织的差异表达蛋白,筛选出圆锥角膜特异性分子标记物,探讨其与圆锥角膜发病机制的关系。
方法:收集12例圆锥角膜组织和4例正常人角膜组织,提取角膜组织总蛋白,行固相PH梯度双向凝胶电泳,分析凝胶电泳图谱,筛选差异表达蛋白,采用基质辅助激光解吸离子化一串联飞行时间质谱(MOLDI-TOF/TOF-MS)和数据库检索对差异蛋白质进行鉴定。
结果:
1、建立了稳定性较好、分辨率高的人圆锥角膜组织和正常角膜组织的双向凝胶电泳图谱(17cm IPG胶条PH5-8);
2、圆锥角膜组织和正常角膜组织的双向电泳代表胶的蛋白点数分别为1035和1070,匹配点数为869个,匹配率为84%。选取有明显表达差异的7个蛋白质点,其中6个蛋白质点在圆锥角膜组织中表达下调,1个蛋白质点表达上调。
3、对7个差异表达蛋白质点进行MALDI-TOF/TOF-MS的鉴定,共获得7张蛋白质点的肽质量指纹图谱(PMF)及二级质谱图(MS/MS),成功鉴定出的7个蛋白质点分别为转化生长因子β诱导的细胞外基质黏附蛋白(TGFBIp/βig-h3)、Ⅵ型胶原蛋白α1链前体(collagen alpha-1(Ⅵ)chain precursor)、αA-晶体蛋白(alpha-crystallin A)、αB-晶体蛋白(alpha-crystallin B)、βB2-晶体蛋白(beta-crystallin B2)、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase)、碳酸酐酶(carbonic anhydrase),除Ⅵ型胶原蛋白α1链前体在圆锥角膜组织中表达上调外,其余6个蛋白成分在圆锥角膜组织中均表达下调。
结论:TGFBIp/βig-h3、alpha-crystallin A、beta-crystallin B2、alpha-crystallin B、glutamine synthetase,collagen alpha-1(Ⅵ) chain precursor 6种在圆锥角膜中差异表达的蛋白质成分可能与圆锥角膜发病相关。