【摘 要】
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该论文第一部分是应用酵母双杂交技术研究与MR-1蛋白相互作用的蛋白,并克隆它们的编码基因.该研究采用美国科隆技术公司酵母双杂交系统3中的酵母菌株AH109和pGBKT7诱饵载体（BD
【出 处】
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中国协和医科大学 中国医学科学院 北京协和医学院 清华大学医学部
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该论文第一部分是应用酵母双杂交技术研究与MR-1蛋白相互作用的蛋白,并克隆它们的编码基因.该研究采用美国科隆技术公司酵母双杂交系统3中的酵母菌株AH109和pGBKT7诱饵载体（BD）.首先,将全长MR-1基因插入到BD载体pGBKT7中（含有GAL4 DNA-binding domain）构建成诱饵质粒,并且确证诱饵质粒单独不能激活报告基因的转录.然后,用这个诱饵质粒筛选人骨骼肌cDNA文库（用pCAT2载体构建,含有GAL4 Activation domain）,并通过β-gal分析验证,最终获得了14个阳性AD质粒,序列分析比较结果表明阳性AD质粒中的cDNA片段分别编码七个蛋白,其中三个与肌肉收缩相关.第二部分是在大肠杆菌表达系统中将MR-1蛋白与谷胱甘肽转移酶（GST）融合表达,并对表达产物进行了分离纯化的探讨.将MR-1基因插入到表达载体pGEX-5X-1中构建成表达质粒,转入宿主菌E.coli BL21,通过IPTG诱导表达.经过SDS-PAGE检测和Western Blot实验验证了MR-1基因在大肠杆菌中的表达.并且应用GST蛋白纯化系统对表达产物进行了初步分离纯化.
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