论文部分内容阅读
第一部分肠梗阻时结直肠癌患者肠神经胶质细胞和肠黏膜屏障的变化目的:探索梗阻性结直肠癌（Obstructive colorectal cancer,OCRC）患者肠神经胶质细胞和肠黏膜屏障的改变。方法:本研究采用随机区组研究设计,共纳入河北医科大学第四医院外二科自2019年1月至2020年11月确诊的40例结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）患者。将纳入的患者根据有无术前肠梗阻分为非梗阻组（n=20）和梗阻组（n=20）。收集两组患者的临床病理资料和术后病理标本。采用SPSS 25.0对患者的临床病理资料进行统计描述及分析;采用免疫组织化学法检测两组患者肿瘤组织中肠神经胶质细胞（Enteric glial cells,EGC）标记性蛋白胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）和S100β的表达,以及两组患者肿瘤组织中肠黏膜屏障相关蛋白ZO-1和claudin-1的表达。结果:1.两组患者的一般临床资料,性别、年龄、梗阻部位、TNM分期、T分期及N分期相比无明显差异,具有可比性（P>0.05）。2.与非梗阻组患者相比,梗阻组患者的CEA水平和中性粒细胞百分比升高,血钠水平降低（P<0.05）;两组患者白细胞、血红蛋白、血小板、总蛋白、白蛋白、血钾、血钙及血氯水平的差异均无统计学意义（P>0.05）。3.与非梗阻组患者相比,梗阻组患者肿瘤组织内GFAP的表达显著降低（P<0.05）;梗阻组患者肿瘤组织内S100β的表达呈下降趋势,但尚未达到统计学差异（P>0.05）。4.梗阻组患者肿瘤组织中肠黏膜屏障相关蛋白ZO-1和claudin-1的表达低于非梗阻组（P<0.05）。结论:1.CRC患者肠梗阻时CEA水平和中性粒细胞百分比升高,而血钠水平降低;2.肠梗阻能够导致CRC患者EGC标志性蛋白的表达减少和肠黏膜屏障的破坏。第二部分肠梗阻时肠神经胶质细胞改变与肠黏膜屏障破坏间的关系目的:探讨肠梗阻时EGC改变与肠黏膜屏障破坏间的关系。方法:本研究选用54只6周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为空白对照组、假手术组、肠梗阻组,每组18只。肠梗阻组小鼠行无菌剖腹手术,用细尼龙线在距离回盲部近端1cm处行肠管结扎,建立肠梗阻模型;假手术组小鼠行无菌剖腹手术,将肠管拉出但不结扎,再将其还纳;空白对照组不行剖腹手术。分别于建模成功后的6h、12h及24h处死各组小鼠,并留取小鼠肠道组织。采用免疫组织化学法检测各组小鼠肠道组织中EGC标记性蛋白GFAP和S100β的表达;采用酶联免疫吸附实验（ELISA法）检测各组小鼠肠道组织中EGC产物胶质细胞源性神经营养因子（Glial-derived neurotrophic factor,GDNF）和神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）水平;采用苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin staining,HE）染色法在光镜下观察肠道黏膜形态改变;采用免疫组织化学法检测各组小鼠肠道组织中肠黏膜屏障相关蛋白ZO-1和claudin-1的表达;应用Spearman检验分析EGC产物与ZO-1和claudin-1的相关性。结果:1.在梗阻6h时,肠梗阻组小鼠肠道组织中GFAP、S100β的表达较假手术组和空白对照组未见明显变化（P>0.05）;在梗阻24h时,肠梗阻组小鼠肠道组织中GFAP、S100β的表达较假手术组和空白对照组升高（P<0.05）。2.在梗阻6h时,与空白对照组和假手术组相比,肠梗阻组GDNF水平有所升高,但尚未达到统计学差异（P>0.05）;肠梗阻组NGF水平升高（P<0.05）。在梗阻12h和24h时,肠梗阻组NGF和GDNF水平与假手术组和空白对照组的差异无统计学意义（P>0.05）。3.HE染色结果提示:与空白对照组相比,假手术组小鼠的肠黏膜组织形态在造模6h和24h时均无显著改变;肠梗阻组小鼠在梗阻6h时肠道绒毛变短、结构破坏,杯状细胞数量减少及少量炎性细胞浸润;梗阻24h时肠梗阻组小鼠肠黏膜上皮结构破坏加重,绒毛萎缩断裂,炎性细胞浸润程度加重,肌层萎缩。免疫组织化学结果显示:在梗阻6h时,肠梗阻组小鼠肠道组织中ZO-1、claudin-1的表达与空白对照组和假手术组相比无明显变化（P>0.05）;在梗阻24h时,肠梗阻组小鼠肠道组织中ZO-1、claudin-1的表达低于空白对照组和假手术组（P<0.05）。4.相关性分析结果显示:肠梗阻6h时小鼠肠道组织中GDNF水平与ZO-1的表达呈显著正相关（r=0.943,P=0.005）,GDNF水平与claudin-1的表达无相关性（P>0.05）;肠梗阻6h时小鼠肠道组织中NGF水平与ZO-1、claudin-1的表达无相关性（P>0.05）。肠梗阻24h时小鼠肠道组织中GDNF水平与ZO-1、claudin-1的表达间均不具有相关性（P>0.05）;NGF水平与ZO-1、claudin-1的表达也不具有相关性（P>0.05）。结论:在肠梗阻6h时,EGC功能发生改变,表现为肠道组织内NGF和GDNF水平均有所升高,且GDNF水平与ZO-1的表达呈显著正相关,同时肠黏膜屏障未见明显破坏。在肠梗阻24h时,EGC数量增加,但其功能明显减退,并且肠黏膜屏障遭到了破坏。