电针耳穴通过SIRT1/PGC-1α途径延缓D-半乳糖致年龄相关性聋豚鼠听皮层老化

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xdzc2009cccc
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目的:探讨SIRT1/PGC-1α途径在年龄相关性聋豚鼠听皮层老化中的作用以及电针“听宫”穴和“翳风”穴是否通过SIRT1/PGC-1α途径调控抗氧化损伤从而延缓D-半乳糖致年龄相关性聋豚鼠听皮层老化。方法:1、动物分组:10只18月龄豚鼠为老年组;将耳廓反射灵敏且无噪声史和无药物史的30只4月龄杂色豚鼠随机分为对照组、D-半乳糖模型组(简称模型组)、D-半乳糖模型+电针组(简称电针组),每组10只。2、模型建立:模型组和电针组豚鼠颈背部皮下注射D-半乳糖(300 mg·kg-1·d-1)6周制作年龄相关性聋模型,电针组豚鼠同时予以电针“听宫”穴和“翳风”穴,每日1次,每次15min,共6周;予以对照组豚鼠颈背部皮下注射相同剂量生理盐水;老年组豚鼠自然喂养。3、听力学检测:模型建立后,检测各组豚鼠ABR阈值以及刺激声强度为110 dB SPL时ABRⅢ波潜伏期的变化情况。4、实时荧光定量PCR(RT-qPCR):分别提取各组豚鼠听皮层总RNA后,采用实时荧光定量PCR在mRNA水平检测各组标本SIRT1、PGC-1α的相对表达量。5、蛋白质印迹法(Western Blot):分别提取各组豚鼠听皮层总蛋白后,采用蛋白质印迹法在蛋白水平检测各组标本SIRT1、PGC-1α的表达情况。6、统计学方法:采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。实验数据以均数±标准差(?±s)表示;采用单因素方差分析,以P<0.05时认为差异有统计学意义。结果:1、体重变化:对照组、模型组和电针组豚鼠在实验前和实验后的体重差异无统计学意义(F=0.035,F=3.309,P>0.05)。2、ABRⅢ波潜伏期:刺激声强度为110 dB SPL时,对照组、模型组、电针组及老年组豚鼠的ABRⅢ波潜伏期分别为2.89±0.09 ms、3.43±0.09ms、3.02±0.08ms和3.49±0.10ms。电针耳穴可影响豚鼠ABRⅢ波潜伏期的变化(F=224.47,P<0.001)。与对照组相比较,老年组和模型组ABRⅢ波潜伏期延长,P<0.001;与模型组相比较,电针组ABRⅢ波潜伏期缩短,P<0.001;模型组与老年组相比较,差异无统计学意义,P>0.05。3、ABR阈值:对照组、模型组、电针组和老年组的ABR阈值分别为:(35.75±4.66)、(74.5±5.59)、(44.4±7.92)和(76.5±7.8)dB SPL;电针耳穴可影响豚鼠ABR阈值的变化(F=195.38,P<0.001)。老年组和模型组ABR阈值较对照组升高,P<0.001;电针组ABR阈值较模型组降低,P<0.001;而模型组与老年组之间差异无统计学意义,P>0.05。4、听皮层SIRT1、PGC-1αmRNA表达:对照组、模型组、电针组及老年组豚鼠听皮层SIRT1 mRNA扩增倍数分别为:1.00±0.00、0.52±0.05、0.87±0.05和0.55±0.07;对照组、模型组、电针组及老年组豚鼠听皮层PGC-1αmRNA扩增倍数分别为:1.00±0.00、0.56±0.08、0.89±0.04和0.56±0.12;电针耳穴可影响SIRT1、PGC-1αmRNA的表达(FSIRT1=11.68,FPGC-1α=122.1,P<0.01)。与对照组比较,老年组和模型组SIRT1、PGC-1αmRNA相对表达量降低,P<0.05;与模型组和老年组比较,电针组SIRT1、PGC-1αmRNA相对表达量增加,P<0.05;模型组与老年组比较,差异无统计学意义,P>0.05。5、听皮层SIRT1、PGC-1α蛋白表达:对照组、模型组、电针组及老年组豚鼠听皮层SIRT1蛋白表达相对灰度值分别为:1.32±0.06、0.67±0.02、1.19±0.03和0.64±0.02;对照组、模型组、电针组及老年组豚鼠听皮层PGC-1α蛋白表达相对灰度值分别为:1.52±0.04、0.68±0.04、1.08±0.07和0.67±0.03;电针耳穴可影响SIRT1、PGC-1α蛋白的表达(FSIRT1=302.06,FPGC-1α=210.14,P<0.001)。与对照组比较,老年组和模型组SIRT1、PGC-1α蛋白表达相对灰度值降低,P<0.001;与老年组和模型组比较,电针组SIRT1、PGC-1α蛋白表达相对灰度值增加,P<0.001;模型组与老年组比较,差异无统计学意义,P>0.05。结论:1、豚鼠颈背部皮下连续注射D-半乳糖(300mg·kg-1·d-1)6周可建立年龄相关性聋模型。2、SIRT1/PGC-1α途径可能参与D-半乳糖致年龄相关性聋豚鼠听皮层老化过程。3、豚鼠听皮层的老化可能与SIRT1、PGC-1α表达下调所致的抗氧化能力降低有关。4、电针“听宫”穴和“翳风”穴可能通过激活SIRT1/PGC-1α途径,增加听皮层抗氧化能力,从而延缓年龄相关性聋豚鼠听皮层的老化过程。
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