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痛风(gout)是一种单钠尿酸盐(monosodium urate, MSU)沉积所致的晶体相关性关节病,与嘌呤代谢紊乱及(或)尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关。痛风患者较以前有明显增多,血清尿酸水平与心血管疾病、高血压、2型糖尿病、血脂异常和慢性肾病等有关,因此需要引起人们的重视。在哺乳动物中,近曲小管是肾处理尿酸的主要部位。尿酸在肾小管的重吸收和分泌是由不同的转运蛋白来完成的。三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ATP-binding cassette superfamily G member2, ABCG2)基因编码的蛋白是迄今为止发现的最为重要的一个促肾小管上皮细胞排泌尿酸通道。ABCG2位点与血清尿酸水平和痛风危险度有关。近来,ABCG2基因与高尿酸血症及痛风的关系已成为研究热点。在临床上我们发现,部分痛风病人在急性发作期的尿酸水平反而降低。我们推测,痛风急性发作时,ABCG2功能增强,尿酸排泄增加,从而表现为血清尿酸水平降低,当这种反馈机制效能降低,患者尿酸水平上升。白介素(IL)-1p是痛风中关键的调节促炎因子,已有多项IL-1β在不同细胞内影响ABCG2表达的研究,但目前尚未见IL-1p对人肾小管上皮细胞内ABCG2影响的报道。目的：本研究旨在观察在IL-1β刺激下的人肾近曲小管上皮细胞的ABCG2mRNA与蛋白表达水平、蛋白亚细胞定位,探求调控的信号通路。方法：1.利用免疫荧光在激光共聚焦显微镜下观察细胞内ABCG2的表达情况和蛋白亚细胞定位。2.分别用不同浓度(0、0.1、1、5、10ng/ml)的IL-1p刺激人肾近曲小管上皮(HK-2)细胞24小时,以及用1ng/ml的IL-1p刺激HK-2细胞不同时间(0、1、2、4、8、16、24、48h),利用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)检测BCG2的]mRNA表达水平,利用Western blot观察其蛋白表达量。3.用10ng/ml IL-1β,10ng/ml IL-10、10ng/ml TGF-β、25ng/ml TNF-α、10ng/mlIL-1p联合10ng/ml IL-10、10ng/ml IL-1β联合10ng/ml TGF-β及10ng/ml IL-1β联合25ng/ml TNF-α处理HK-2细胞24小时后提取蛋白,以及在加入10ng/ml IL-1β1小时后分别用信号通路抑制剂(10uM JNK抑制剂Sp600125、5uM ERK抑制剂U-0126,100uM NF-κB抑制剂PDTC、luM PI3K抑制剂Wortmannin, lOuM JAK抑制剂AG-490)和5uM泛素-蛋白酶体抑制剂MG132处理饥饿后的HK-2细胞24小时,通过Western blot检测ABCG2蛋白表达水平。然后用0、1、10ng/ml IL-1β作用HK-2细胞24小时后通过Western blot分别检测NF-xB亚基(P50、P52、P65)、AKT、JNK、 ERK、JAK蛋白表达水平。结果：与MCF-7、HEK293、T47D细胞相比,HK-2细胞中等量表达ABCG2。IL-1p直接作用于HK-2细胞可降低ABCG2的mRNA表达水平,其表达量随浓度增加或时间延长而降低,但蛋白表达升高,其蛋白定位无明显迁移。IL-1β联合TNF-α能进一步增强HK-2细胞ABCG2蛋白表达水平,单独用TNF-α、IL-10、TGF-β,以及IL-1β联合IL-10或TGF-β无明显影响。以PTDC阻断NF-xB后抑制IL-1β诱导的ABCG2蛋白的表达,分别阻断AKT, JAK、JNK、ERK通路以及以MG132阻断泛素-蛋白酶体水解通路后对IL-1β诱导的ABCG2蛋白表达无明显影响。进一步检测0、1、10ng/ml IL-1β刺激后的HK-2细胞核蛋白和胞浆蛋白中的JNK, ERK、NF-κB亚基(P65、P50、P52)、AKT、JAK表达,发现与未加刺激的对照组比,P50和P65表达增强,胞浆表达量低于胞核,以1ng/ml IL-1β刺激后更高。P52、JNK、ERK、AKT、JAK无明显改变。结论：HK-2细胞中等量表达ABCG2。 IL-1β可下调人肾近曲小管上皮细胞的ABCG2的mRNA表达,但增强HK-2细胞ABCG2蛋白表达水平。其蛋白定位无明显迁移,这种表达增强的蛋白不通过泛素-蛋白酶体水解途径降解或还经过其他途径作用。IL-1p联合TNF-α能进一步上调HK-2细胞ABCG2蛋白表达。IL-1p可能通过NF-κB信号通路实现对ABCG2蛋白表达的上调,其中主要通过影响NF-γB亚基P50和P65的蛋白表达,主要作用于细胞核。