后期促进复合物（APC）是一种E3泛素连接酶,它通过连续地对一系列细胞周期调节子进行泛素化和对蛋白酶体降解而调控细胞周期中的有丝分裂期和G1期。我们对APC合成泛素链的机理及其形成泛素链的构型尚不清楚。因此,我们设计了一个简化的泛素化反应体系,即合成只具有单个泛素化位点的APC底物,其使得APC泛素化反应产物的分析和鉴定变得相对简单。利用这个简化的泛素化反应体系,我们研究了在APC底物上形成泛素链的构型分布。结果发现,APC催化的泛素化反应优先选择形成由泛素赖氨酸残基11所连接的泛素链,并且发现这种泛素链对底物的降解至关重要。进一步研究发现,APC泛素化反应形成这一特定类型的泛素链的原因是在反应体系中存在着一个以前未被发现的泛素交联酶Ube2S,Ube2S在APC泛素化反应中的功能是延长泛素链的长度。结果提示,APC需要通过两步反应来合成长的聚泛素链,底物先被UbcH10或者UbcH5进行单泛素化,然后由Ube2S增加聚泛素链的长度。我们发现Ube2S可以与APC共纯化,并且显性负面的Ube2S突变体减慢了APC底物在细胞溶解液中的降解速度。因此,我们认为Ube2S是APC泛素化通路中的一个重要的新成员。