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子宫内膜上皮细胞的炎性病变是奶牛子宫内膜炎发病的根本所在,探究炎症过程中上皮细胞结构与功能的变化,将有助于阐明疾病发病机制和治疗药物的研发。丹参是广泛用于治疗奶牛子宫内膜炎的中药之一,但从子宫内膜上皮细胞研究丹参的作用机制的报道较少。为了探讨丹参水提物对LPS诱导的炎症模型的保护机制,开展了以下研究。1.筛选LPS诱导炎症模型的最佳剂量和作用时间。设置5个不同浓度LPS分别作用于山羊EEC 6h、12h、24h后,MTT法检测EEC的细胞活性。结果表明5μg/m L LPS作用12h时促进细胞增殖作用最为明显,在此基础上,建立EEC炎症模型,ELISA检测模型组中TNF-α和IL-1β含量显著高于对照组(P<0.01),故确定LPS最佳致炎剂量为5μg/m L,最佳作用时间是12h。2.筛选SME对EEC最佳作用剂量。以6个不同浓度的SME作用EEC 24h,结果表明SME对EEC未产生明显毒性,且促进EEC增殖。由此确定SME作用浓度分别为250μg/m L(高剂量组)、100μg/m L(中剂量组)、10μg/m L(低剂量组)。3.SME对EEC炎症模型中TNF-α、IL-1β、NO、PGE2、TLR4、CD14、MMP-2、MMP-9等蛋白表达的影响。分别用高、中、低剂量的SME处理EEC细胞炎症模型,观察SME作用0h、4h、6h、12h、18h、24h、36h后各项指标的变化。结果表明,模型组中TLR4、CD14、TNF-α、IL-1β、NO、PGE2、MMP-2和MMP-9等蛋白在各自到达峰值时含量均明显高于对照组(P<0.01);不同浓度SME作用炎症模型后,均能使这些指标降低,且高剂量SME作用效果最为明显(P<0.01)。4.SME对EEC炎症模型中相关基因表达的影响。实时荧光定量PCR检测SME对EEC炎症模型中相关基因表达,结果表明,模型组中TNF-α、IL-1β、TLR4、CD14、MMP-2、MMP-9 m RNA基因表达水平到达峰值时显著高于对照组(P<0.01)。用高、中、低剂量的SME处理后均能降低细胞炎性因子TNF-α、IL-1β、TLR4、CD14、MMP-2、MMP-9的表达,且高剂量SME作用最为明显(P<0.01)。另外,随着作用时间的延长,MMP-2、MMP-9表达逐渐降低,24h后明显低于对照,SME作用后又逐渐恢复到正常水平。综上所述,EEC炎症反应的发生可能与LPS诱导激活TLR信号通路(TLR4、CD14),进而上调细胞因子(TNF-α、IL-1β)、炎症介导因子(NO、PGE2)和基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的表达有关。而SME作用于炎症细胞后,通过降低炎症介导因子、TLR信号通路的表达,达到减缓炎性反应的程度;在炎症反应初期,SME通过下调MMPs的表达,抑制了子宫内膜细胞结构被降解的炎性损伤,并在炎症反应后期通过上调MMP-2、MMP-9的表达,从而提高子宫自我修复重塑的能力。以上可能是LPS诱导炎性反应的发生机制和丹参提取物的抗炎作用机制发挥的途径,但其具体机制尚需进一步研究。