近年来,由血清4型禽腺病毒（Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）感染引起的肝炎-心包积液综合征在我国屡有发生,死亡率达20%～80%,给养禽业造成巨大经济损失。本研究在病毒分离鉴定的基础上,对FAdV-4分离毒株的生物学特性进行了系统研究,筛选出了免疫原性好的FAdV-4 JH株作为灭活疫苗候选株,并开展了大规模悬浮培养、灭活工艺、乳化工艺以及安全性和有效性研究,制备了安全、高效的FAdV-4灭活疫苗,为FAdV-4的有效防控提供技术支撑与产品保障。1.血清4型禽腺病毒灭活疫苗候选株的筛选本研究从疑似禽腺病毒感染的鸡群进行病毒分离和鉴定,最终分离鉴定得到5株FAdV-4,分别命名为JH、SD、GX、TJ和WF株。对5株分离株在21日龄SPF鸡进行致病性评估。结果显示,肌肉接种2×105.0 TCID50后,各毒株的致死率分别为100%、100%、90%、80%和80%;致死鸡的剖检病变均表现为心包积液与包涵体肝炎,组织学病变为肝细胞内有嗜碱性核内包涵体。将5株分离株灭活后进行免疫原性试验,中和抗体几何平均数水平分别为1:114.7、1:86.5、1:46.8、1:55.3、1:39.3,结果显示JH株诱导机体产生的中和抗体水平远高于其他4株分离株,表明JH株具有更好的免疫原性。通过JH毒株的全基因组序列以及主要血清型保护性抗原纤突蛋白Fiber 1以及Fiber 2的氨基酸序列与NCBI中报道的30个国内及国外血清4型禽腺病毒代表毒株进化树的分析,结果表明JH毒株序列与国内血清4型禽腺病毒毒株属于同一分支,同源性99%以上,且该毒株具有适应于细胞培养、培养后产生的病毒滴度高等特点,适合作为疫苗候选株用于免疫防控国内由血清4型禽腺病毒感染引起的禽腺病毒病。对分离的JH株的纯净性及特异性进行检测,结果表明其完全达到作为种毒的要求,最后对JH株的毒力、免疫原性和攻毒保护率等各项指标进行了评价,结果显示JH株免疫后能为免疫鸡群提供100%保护力,且免疫组攻毒后14天内没有排毒现象,连续15代传代毒力和免疫原性稳定。因此,最终确定JH株作为后续疫苗株用于后续培养工艺及工厂化生产研究。2.血清4型禽腺病毒培养工艺及工厂化研究为了获得高质量的灭活疫苗,本研究首先对培养工艺开展了研究。结果显示,生物反应器转速为40 rpm,溶氧值不低于50%,可保证细胞生长所需的含氧条件;200 g纸片载体初始细胞接种总数为（1±0.2）×109个细胞,含10%胎牛血清的DMEM/F-12培养液,pH维持在7.0-7.2。按MOI值为0.1接种病毒,维持液血清含量为2%,接毒后94～98 h,收获的病毒液效价可以达到109.0TCID50/mL。进一步对油乳剂灭活疫苗的制备工艺展开研究,结果显示,用0.1%浓度的甲醛溶液,37℃灭活24h,疫苗中抗原终含量为107.0 TCID50/mL,按当水相、油相比例1:3,乳化剪切转速以3000～4000 rpm乳化制备疫苗。为了评估疫苗的产品质量,本研究选择不同日龄SPF鸡进行安全性检验,将3批次疫苗采用皮下或肌注两种方式以单剂量、单剂量重复和超剂量接种。结果显示不同批次疫苗安全性均高达100%,且不影响其生产性能。效力检测采用攻毒保护试验和中和抗体检测法,以皮下免疫方式免疫21日龄SPF鸡,同时设置SPF鸡对照组,免疫后21日采血,检测血清中和抗体效。同时用JH株、SD株和GX株3株当前流行毒株进行攻毒保护试验。结果显示,采用颈部皮下和肌肉注射两种免疫方式,均可以使免疫21日后的鸡群产生高水平的中和抗体,进而为鸡群提供较高的保护力,而对照组则全部死亡。同时结果表明,疫苗的免疫产生期为21天、效力持续期为5个月。该疫苗的成功研制为防控FAdV-4提供了可靠的保障。