论文部分内容阅读
色谱法(Chromatography)是一种对混合物进行分离分析的方法。色谱法因其具有很强的分离能力,加上现代色谱检测器具有很高的灵敏度,色谱法已然成为分析复杂混合物的重要手段。其中,应用最广泛的高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),自20世纪60年代崛起,经过几十年的发展,在理论和实践等方面都日趋完善,目前已经广泛应用于医药、食品、环境、农业及生命科学等各个领域。高效液相色谱法与经典液相色谱法相比,具有高效、高速、高灵敏度和高自动化等特点,与气相色谱相比同时也具有应用范围广、选择性高、对温度要求低以及馏分易于收集和制备等优点。霉菌毒素(Mycotoxins)是一类由产毒丝状真菌产生的有毒代谢产物,能够在多种作物上存活,尤其常见于作物收获前后。霉菌毒素可通过食品或饲料进入人和动物体内,引起多脏器的损伤,危害着人类和动物的生命安全。因此,对于霉菌毒素能否进行准确的检测变得十分重要。然而,由于霉菌毒素在环境样品中是微量存在的,且其生存的基质成分复杂,这无疑给检测造成了巨大的困扰。对于常见的黄曲霉毒素(Aflatoxins),目前已有较为成熟的检测方法,但是对于同样常见的伏马菌素(Fumonisins),却一直缺乏一种有效且重现性良好的检测方法。针对这一问题,本人在论文的第一部分进行了实验方法的探索研究,并取得了较为满意的实验结果。利多卡因与丙泊酚是临床上广泛应用的麻醉药,联合应用于小儿手术、人工流产等的镇痛麻醉,但目前尚无同时检测这两种物质的文献报道。在论文的第二部分,采用高效液相色谱-在线净化技术,在兼顾样品检出限与线性范围的同时,串联使用了紫外(Ultraviolet,UV)和荧光(Fluorescence Detection,FLD)检测器,对血液中的麻醉药物利多卡因和丙泊酚进行了同时检测,取得了满意的实验结果,对于指导临床用药具有实际意义。第一部分高效液相色谱法在线柱前衍生检测伏马菌素B1和B2目的:建立测定伏马菌素B1和B2的在线柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测新方法。方法:应用高效液相色谱技术,联用高灵敏的荧光检测器和高自动化的在线衍生技术,对玉米样品中的伏马菌素B1和B2进行检测。采集到的玉米样品粉碎后经过80%甲醇溶液震荡提取两次,离心后取上清液,经过滤膜过滤后,用PBS缓冲液稀释待用。而后,样品溶液需经过免疫亲和柱(Immunoaffinity Column,IAC)除杂、浓缩,最终的洗脱液经滤膜过滤后进样分析。在检测之前,样品要先经过在线衍生,以邻苯二甲醛(O-phthalaldehyde,OPA)和2-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol,2-ME)为衍生剂,而后进入C18色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量。结果:在优化的条件下测得伏马菌素B1和B2的线性范围分别为0.1~5.0μg/m L(FB1)以及0.06~2.5μg/m L(FB2),线性回归方程分别为Y=7832.79+116714.74X(FB1),Y=4499.88+53501.98X(FB2),线性相关系数分别为0.9999和0.9992,最低检出限分别为0.10和0.26 mg/kg。分别对1.0μg/m L的FB1和0.5μg/m L的FB2每天连续进行7次平行测定,并连续测定7天,测得FB1的相对标准偏差为4.38%(日内)和6.90%(日间);FB2的相对标准偏差为3.15%(日内)和8.50%(日间)。对玉米样品中的伏马菌素B1和B2进行检测,其加标回收率在85.6%~119.2%之间。结论:该方法简便快速,自动化程度高,免去了人工衍生过程中的操作误差,检测结果准确可靠、重复性好。第二部分在线净化-高效液相色谱双检测器法同时测定麻醉药物利多卡因和丙泊酚目的:建立同时检测血浆中麻醉药物利多卡因和丙泊酚的在线净化-双检测器-高效液相色谱新方法。方法:本实验基于高效液相色谱法,联用在线净化以及串联检测器技术,对利多卡因和丙泊酚进行了联合检测。对实验的色谱条件以及在线净化条件进行了优化。最终,血液样品经12000 r/min离心10 min,取上清,用甲醇沉淀蛋白后直接进样,经在线固相萃取柱在线净化,梯度洗脱经反相C18色谱柱分离,紫外检测器(UV)串联荧光检测器(FLD)检测,外标法定量。而后,对wistar大鼠注射待测药物并对其血液进行了检测。结果:在优化的条件下测得利多卡因的线性范围为0.08~80 mg/L,线性回归方程Y=-0.2263+0.8281X,相关系数r=0.9999,最低检出限为24μg/L。分别对0.2,2.0,20 mg/L的利多卡因连续进行6次平行测定,获得相对标准偏差为1.2~5.0%。对血液中的利多卡因进行净化检测,其加标回收率在95.4%~108.9%之间。在优化的条件下测得丙泊酚的线性范围为0.0025~20 mg/L,线性回归方程为UV:Y=-0.4053+0.8262X,r=0.9999,FLD:Y=-731.3385+1999852.5522X,r=0.9999,最低检出限为0.75μg/L。分别对0.05,0.5,5.0mg/L的丙泊酚连续进行6次平行测定,获得相对标准偏差为1.9~3.5%。同样,对血液中的丙泊酚进行净化检测,其加标回收率在96.9%~98.6%之间。结论:该方法简便快速,易实现自动化,可用于利多卡因和丙泊酚血药浓度的监测。