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虎斑乌贼(Sepia pharaonis)是一种大型头足类动物,主要生活在南海海域,具有口味鲜美、对饵料消化充分、养殖潜力大、对环境适应性强、生长迅速等特点,同时蛋白质含量高,EPA/DHA比例高,具有较高的营养价值和药理功效。研究表明,从乌贼墨、乌贼壳中提取的多糖、蛋白复合物等物质显示出良好的抗肿瘤活性,从与乌贼相类似的海洋动物中提取的多糖、蛋白质和萜类等物质也具有抗肿瘤、抗衰老、增强免疫力、抗高血压、抗氧化等作用。为了更好地利用这些活性物质,需要对其进行提取、分离纯化、结构分析、生物活性方面的研究。本课题以虎斑乌贼肌肉为试验材料,研究了虎斑乌贼肌肉糖蛋白的提取、脱蛋白、分离纯化、初步结构及其抗氧化活性。主要研究结果如下：采用响应面法优化虎斑乌贼肌肉糖蛋白(SPMG)的盐法提取工艺。研究了NaCl浓度、液料比、提取时间和提取温度对SPMG得率的影响,在单因素实验的基础上,通过四因素三水平的Box-Behnken设计优化,得到的最佳提取工艺参数是：NaCl浓度3.8%,液料比20.78mL/g,提取时间为1.48h,提取温度为66.03℃,在此条件下,SPMG得率为7.93%。采用正交实验优化SPMG Sevage法脱蛋白工艺,同时测定硫酸铵沉淀SPMG所需饱和度以及SPMG的等电点。结果表明SPMG采用Sevage法脱蛋白得到的最佳工艺参数为：样液与试剂的比例为2：1(V/V),氯仿与正丁醇的比例为6：1(V/V),振摇时间15min,静置时间40min,脱蛋白4次,此时脱蛋白率可达到67.97%；硫酸铵溶液饱和度为80%时沉淀SPMG效果最佳；SPMG的等电点为5.6。SPMG经DEAE-Cellulose52离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析后,得到两个不同组分SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ,采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ的纯度,结果表明为均一组分,其分子量分别为42.5kDa和36.3kDa。对比p-消去反应前后紫外扫描图谱,显示SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ都有O-糖肽键的存在；红外光谱结果表明SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ中存在糖和蛋白复合物的特征吸收峰,糖苷键类型都为吡喃型；氨基酸分析结果表明,SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ中富含酸性氨基酸,天冬氨酸和谷氨酸占总氨基酸含量的百分比分别为40.20%和36.75%,SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ中含量最高的氨基酸均为谷氨酸,其含量分别为28.04%和20.07%；采用GC-MS法检测到SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ中的单糖组成主要为岩藻糖、葡萄糖和甘露糖,其中葡萄糖含量最高,分别为57.18%和59.02%。通过测定SPMG的还原力以及对超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢的清除能力,考察SPMG的抗氧化活性。结果显示随着SPMG质量浓度的增加,其还原力以及对超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢的清除能力逐渐增强,呈现良好的量效关系,据此可认为SPMG具有一定的抗氧化活性。