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中药蛇胆是常用贵重药材，具有清热解毒、化痰镇痉的功效。《中国药典》（2010年版）中收载以蛇胆为主要原料的制剂有20余种，但由于其蛇胆药材来源复杂和鉴定困难却缺乏相应的药材标准。近年来DNA条形码鉴定是中药鉴定领域的研究热点，CO I序列已成功用于猪胆粉、金钱白花蛇等动物类药材的鉴定。为了建立中药蛇胆药材的质量控制方法，本文探讨了DNA条形码鉴定中药蛇胆的可行性。 目的：建立一种蛇胆的DNA分子鉴定方法，并考察其实际应用的可行性。 方法：分别于四省采集24种共226个蛇胆样品，使用CTAB法对蛇胆样品进行提取。利用自行设计的通用引物SNCOI2扩增所有样品的CO I序列并进行双向测序，拼接后去掉引物区获得所需序列。在GenBank中对序列进行Blast相似性鉴定，验证测序结果和基源物种是否一致。然后利用上述方法对124个商品蛇胆进行DNA提取和PCR扩增，所有测序成功的样品均经Blast鉴定物种来源。 结果：226个样品蛇胆均能提取出足量DNA，成功扩增并获得相应CO I序列。利用MEGA5.0软件对序列进行处理和遗传差异分析，序列长度一致为658bp，经Blast相似度查询，除颈棱蛇和斜鳞蛇Genbank中暂无收录外，其余22种蛇类和已有的同种序列相似度在96％以上。24种蛇类的平均种内遗传距离为0～0.0295，远小于平均种间遗传距离0.1014～0.2691，具有显著的barcoding gap。而商品蛇胆DNA发生降解，最后124个商品蛇胆共有43个成功获得CO I序列，测序成功的43个样品均被成功鉴定，序列相似度高于96%。 结论：成功建立了蛇胆的DNA分子鉴定方法，经验证该方法稳定可靠，但在实际应用过程中应注意防止样品DNA的降解。自行设计的引物SNCOI2具有较好的通用性，建议作为蛇胆鉴定的通用引物。