目的 本实验成功构建了EGFR胞外段(s EGFR)工程菌,且表达、纯化后的s EGFR可溶性蛋白能与EGF结合,抑制EGF/EGFR信号的传递,对EGF刺激肿瘤细胞的增殖有抑制作用。方法 PCR扩增EGFR胞外区基因片段(s EGFR),限制性内切酶Nde I/Xho I双酶切s EGFR和表达载体p ET-28a,再用连接酶连接起来形成重组质粒s EGFR-p ET-28a,转入BL21(+)构建工程菌,原核表达,然后经过镍柱亲和层析分离纯化收取目的蛋白。Western Blot初步鉴定,CCK-8法检测纯化后s EGFR的活性。结果 重组质粒的PCR鉴定、双酶切鉴定和测序结果都显示s EGFR-p ET-28a重组质粒构建成功;SDS-PAGE电泳结果显示,在诱导菌、诱导上清、镍柱亲和层析洗脱液中都存在分子量在58KD左右的蛋白;Western blot表明,s EGFR能与EGFR抗体特异性结合;CCK-8实验结果显示,目的蛋白对由EGF导致的促H1648细胞增殖有抑制效果,且320 ng/ml时效果最佳。结论 构建的s EGFR-p ET-28a工程菌能够表达具有活性的目的蛋白s EGFR,且蛋白浓度在320 ng/ml时,对由EGF导致促H1648细胞增殖的抑制效果已经达到最佳。