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目的:本实验通过温针灸干预脊髓损伤(SCI)大鼠“百会”、“大椎”、“腰阳关”、“足三里”等穴,对比观察温针灸头部腧穴对SCI大鼠行为学及VCAM-1、Wnt-3a及β-Catenin的表达的影响,以探讨温针灸治疗SCI大鼠的可能作用机制,为醒神通督温针灸治疗脊髓损伤提供实验依据和相关理论基础。方法:本大鼠实验研究的设计方法为随机分组,平行对照,双盲法。将20只大鼠按改良Allen’s打击法打击第10胸椎(T10)以制备SCI大鼠模型,随机将其分成模型对照组、夹脊穴急性期组、夹脊穴恢复期组、头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组,每组4只,另设正常对照组4只。术后第1天、14天对所有造模手术大鼠进行BBB评分。按实验设计对各组大鼠施行相应治疗方案。于术后第14天,采集24只大鼠的血清、脊髓及端脑标本。采用ELISA法检测大鼠血清中VCAM-1的表达变化;实时荧光定量RT-PCR技术检测大鼠脊髓及端脑中VCAM-1、Wnt-3a的m RNA的表达变化;Western blot技术观察大鼠脊髓及端脑中Wnt-3a及β-Catenin蛋白的表达变化。比较不同组别大鼠的BBB评分、VCAM-1表达及Wnt/β-Catenin信号通路中蛋白表达的差异,并将相关实验数据采用SPSS 23.0统计软件进行统计分析处理。结果:1.各组大鼠行为学指标观察于术后1天、14天,对各组大鼠进行BBB评分,比较结果如下:⑴造模手术1天后各造模手术组大鼠BBB评分都为0分,各组大鼠均未见双后肢随意运动,各组大鼠均出现完全性截瘫,表明脊髓损伤模型建立成功;⑵术后14天,与模型对照组比较,夹脊穴急性期组、头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组BBB评分均有显著性提高(P<0.05),而夹脊穴恢复期组BBB评分稍高于模型对照组,但无显著性提高(P>0.05);⑶术后14天,与夹脊穴急性期组比较,头部腧穴急性期组BBB评分有显著性提高(P<0.05);头部腧穴恢复期组BBB评分稍高于夹脊穴恢复期,但无显著性提高(P>0.05);⑷术后14天,夹脊穴急性期组BBB评分稍高于夹脊穴恢复期,但无显著性提高(P>0.05);头部腧穴急性期组BBB评分高于头部腧穴恢复期组,有统计学意义(P<0.05)。2.各组大鼠血清中VCAM-1含量比较实验结果示:正常对照组、模型对照组、夹脊穴急性期组、夹脊穴恢复期组、头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组间VCAM-1的含量无统计学意义(P>0.05)。3.各组大鼠脊髓和端脑中VCAM-1的m RNA含量比较3.1各组大鼠脊髓中VCAM-1的m RNA含量比较分析如下:⑴与正常对照组相比,余下五组大鼠中VCAM-1的m RNA均有显著性增多(P<0.05);⑵与模型对照组相比,夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中VCAM-1的m RNA均未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性组及头部腧穴恢复期组中VCAM-1的m RNA均有极显著性增多(P<0.01);⑶与夹脊穴急性期组相比,头部腧穴急性期组中VCAM-1的m RNA有极显著性增多(P<0.01);与夹脊穴恢复期组相比,头部腧穴恢复期组中VCAM-1的m RNA有极显著性增多(P<0.01);⑷与夹脊穴恢复期组比,夹脊穴急性期组中VCAM-1的m RNA未见显著性增多(P>0.05);与头部腧穴恢复期组比,头部腧穴急性期组中VCAM-1的m RNA未见显著性增多(P>0.05)。3.2各组大鼠端脑中VCAM-1的m RNA含量比较分析如下:⑴与正常对照组相比,模型对照组、夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中VCAM-1的m RNA未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组中VCAM-1的m RNA均有极显著性增多(P<0.01);⑵与模型对照组相比,夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中VCAM-1的m RNA均未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性组及头部腧穴恢复期组中VCAM-1的m RNA均有极显著性增多(P<0.01);⑶与夹脊穴急性期组相比,头部腧穴急性期组中VCAM-1的m RNA有极显著性增多(P<0.01);与夹脊穴恢复期组相比,头部腧穴恢复期组中VCAM-1的m RNA有极显著性增多(P<0.01);⑷与夹脊穴恢复期组比,夹脊穴急性期组中VCAM-1的m RNA未见显著性增多(P>0.05);与头部腧穴恢复期组比,头部腧穴急性期组中VCAM-1的m RNA未见显著性增多(P>0.05)。4.各组大鼠脊髓和端脑中Wnt-3a的m RNA含量比较4.1各组大鼠脊髓中Wnt-3a的m RNA含量比较分析如下:⑴与正常对照组相比,模型对照组、头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA均有极显著性增多(P<0.01),而夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA均未见显著性增多(P>0.05);⑵与模型对照组相比,夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA均未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA均有极显著性增多(P<0.01);⑶与夹脊穴急性期组相比,头部腧穴急性期组中Wnt-3a的m RNA有极显著性增多(P<0.01);与夹脊穴恢复期组相比,头部腧穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA有极显著性增多(P<0.01);⑷与夹脊穴恢复期组比,夹脊穴急性期组中Wnt-3a的m RNA未见显著性增多(P>0.05);与头部腧穴恢复期组比,头部腧穴急性期组中Wnt-3a的m RNA未见显著性增多(P=0.05)。4.2各组大鼠端脑中Wnt-3a的m RNA含量比较分析如下:⑴与正常对照组相比,模型对照组、夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA均未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA均有极显著性增多(P<0.01);⑵与模型对照组相比,夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA均未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA均有极显著性增多(P<0.01);⑶与夹脊穴急性期组相比,头部腧穴急性期组中Wnt-3a的m RNA有极显著性增多(P<0.01);与夹脊穴恢复期组相比,头部腧穴恢复期组中Wnt-3a的m RNA有极显著性增多(P<0.01);⑷与夹脊穴恢复期组比,夹脊穴急性期组中Wnt-3a的m RNA未见显著性增多(P>0.05);与头部腧穴恢复期组比,头部腧穴急性期组中Wnt-3a的m RNA有极显著性增多(P<0.01)。5.各组大鼠脊髓和端脑中Wnt-3a蛋白含量比较5.1各组大鼠脊髓中Wnt-3a蛋白含量比较分析如下:⑴与正常对照组相比,余下五组大鼠中Wnt-3a蛋白均有极显著性增多(P<0.01);⑵与模型对照组相比,夹脊穴急性期组、夹脊穴恢复期组及头部腧穴恢复期组中Wnt-3a蛋白均未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组中Wnt-3a蛋白有极显著性增多(P<0.01);⑶与夹脊穴急性期组相比,头部腧穴急性期组中Wnt-3a蛋白有极显著性增多(P<0.01);与夹脊穴恢复期组相比,头部腧穴恢复期组中Wnt-3a蛋白未见显著性增多(P>0.05);⑷与夹脊穴恢复期组相比,夹脊穴急性期组中Wnt-3a蛋白有显著性增多(P<0.05);与头部腧穴恢复期组比,头部腧穴急性期组中Wnt-3a蛋白有极显著性增多(P<0.01)。5.2各组大鼠端脑中Wnt-3a蛋白含量比较分析如下:⑴与正常对照组相比,模型对照组、夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中Wnt-3a蛋白均未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组中Wnt-3a蛋白均有极显著性增多(P<0.01);⑵与模型对照组相比,夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中Wnt-3a蛋白均未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组中Wnt-3a蛋白有显著性增多(P<0.05);⑶与夹脊穴急性期组相比,头部腧穴急性期组中Wnt-3a蛋白有极显著性增多(P<0.01);与夹脊穴恢复期组相比,头部腧穴恢复期组中Wnt-3a蛋白未见显著性增多(P>0.05);⑷与夹脊穴恢复期组相比,夹脊穴急性期组中Wnt-3a蛋白未见显著性增多(P>0.05);与头部腧穴恢复期组比,头部腧穴急性期组中Wnt-3a蛋白有显著性增多(P<0.05)。6.各组大鼠脊髓和端脑中β-Catenin蛋白含量比较6.1各组大鼠脊髓中β-Catenin蛋白含量比较分析如下:⑴与正常对照组相比,余下五组大鼠中β-Catenin蛋白均有显著性增多(P<0.05);⑵与模型对照组相比,夹脊穴急性期组、夹脊穴恢复期组及头部腧穴恢复期组中β-Catenin蛋白均未见明显增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组中β-Catenin蛋白均有极显著性增多(P<0.01);⑶与夹脊穴急性期组相比,头部腧穴急性期组中β-Catenin蛋白有极显著性增多(P<0.01);与夹脊穴恢复期组相比,头部腧穴恢复期组中β-Catenin蛋白未见显著性增多(P>0.05);⑷与夹脊穴恢复期组相比,夹脊穴急性期组中β-Catenin蛋白未见显著性增多(P>0.05);与头部腧穴恢复期组比,头部腧穴急性期组中β-Catenin蛋白均有极显著性增多(P<0.01)。6.2各组大鼠端脑中β-Catenin蛋白含量比较分析如下:⑴与正常对照组相比,模型对照组、夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中β-Catenin蛋白均未见显著性增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组中β-Catenin蛋白均有极显著性增多(P<0.01);⑵与模型对照组相比,夹脊穴急性期组及夹脊穴恢复期组中β-Catenin蛋白均未见明显增多(P>0.05),而头部腧穴急性期组及头部腧穴恢复期组中β-Catenin蛋白均有极显著性增多(P<0.01);⑶与夹脊穴急性期组相比,头部腧穴急性期组中β-Catenin蛋白有极显著性增多(P<0.01);与夹脊穴恢复期组相比,头部腧穴恢复期组中β-Catenin蛋白有显著性增多(P<0.05);⑷与夹脊穴恢复期组相比,夹脊穴急性期组中β-Catenin蛋白未见显著性增多(P>0.05);与头部腧穴恢复期组比,头部腧穴急性期组中β-Catenin蛋白有极显著性增多(P<0.01)。结论:1.温针灸头部腧穴对SCI大鼠的行为学指标有一定的改善作用,可改善大鼠双后肢活动障碍,且在急性期介入对后肢活动障碍的改善效果更佳。2.温针灸头部腧穴可明显上调脊髓和端脑中VCAM-1的表达。3.温针灸头部腧穴可明显上调大鼠脊髓和端脑中Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白Wnt-3a、β-catenin的表达,且急性期介入,其促进作用更加显著。4.从醒神通督立法,急性期干预SCI大鼠可更好地改善双后肢活动障碍,其机制可能与急性期温针灸刺激头部腧穴可明显上调VCAM-1及Wnt/β-Catenin信号通路中关键蛋白表达有关。