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柳树是杨柳科（Salicaceae）柳属（Salix）树种的统称。柳属树种十分丰富,世界上共有500多个乔灌木树种,为重要的林木类群,具有重要的生态和经济价值。柳树种间杂交及无性繁殖容易,有些树种世代很短,一年生就能开花结实,是林木中进行遗传学研究的理想材料。 微卫星（SSR）是指由1-6个核苷酸为单位、呈串联重复的DNA序列,广泛分布于真核生物的整个基因组中。微卫星标记具有共显性、多态性高、重复性好等特点,是较为理想的分子标记。被广泛地用于群体遗传研究、遗传图谱构建、数量性状基因QTL定位、辅助选择等。由于可用于柳树研究的微卫星标记很少,限制了对柳树这些领域的研究,急需开发适于柳树研究的SSR标记,以促进柳树分子遗传学研究的发展。 本研究从几个方面来探索柳属SSR引物的开发,重点构建黄花柳微卫星富集文库来开发,首次在柳属中提出了一种高效的微卫星筛选分离策略:以生物素标记的（CT）15和（GT）15为探针进行杂交,借助磁珠筛选出含微卫星的Sau3A Ⅰ酶切片段,共得到1056个质粒,然后用地高辛标记（CT）8和（GT）8混合探针点杂交对384个克隆进行二次筛选;从没经过二次筛选的克隆中随机挑取360个和经过二次筛选的24个阳性克隆进行测序,发现含微卫星的克隆有183个（360个文库克隆中,162个克隆中含微卫星序列（45%）,24个二次杂交阳性克隆中有21个含有微卫星序列（89%））。 最后得到的44个非同源性克隆中,共含有53个微卫星位点;对微卫星种类进行分析,其中（TC/AG）n,（GA/CT）n,（CA/GT）n比例最高,共占74%,并发现（A/T）n,（AT/TA）n,及三碱基重复微卫星（GGT）n,（ACC）n,（CTC）n,（GCT）n,（CCT）n,（GGC）n。 利用软件Repeatmasker在线对480条柳属核酸序列进行微卫星统计,发现78条含有微卫星（16.25%）。二碱基重复（AT）n、（CT）n、（TG）n含量最多,选取蒿柳（Salix viminalis）叶子的Lambda TriplEx载体cDNA文库中微卫星序列设计出8对引物,为利用数据库数据开发SSR标记提供了一条有效的途径。 选取从黄花柳富集文库中得到的19个各种类型微卫星位点设计引物,用5个种个体混合DNA组成模板池方法检测引物种间的多态性信息,结果表明:5对引物（Scs1,Scs2,Scs3,Scs16,Scs17）多态性较好,其中引物Scs1检测到的等位基因最多有6个;最少的Scs3中检测到3个。这5对引物适于柳属种间遗传学研究。引物Scs1和Scs3还进一步分别在簸箕柳16个个体、杞柳10个体中进行了扩增,结果均表明有较好的多态性。 用杨属毛果杨（P.trichocarpa Hook.）23对微卫星标记在柳属种间进行了扩增:6对引物在簸箕柳和杞柳种间成功扩增,其中一对引物还在杞柳23个个体中检测到6个等位基因;验证了SSR引物在杨属和柳属间有较好的通用性。