【摘 要】
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生二素链霉菌能够合成大环内酯类抗生素螺旋霉素。负责螺旋霉素生物合成的基因序列大部分已经被测序,通过对一些功能基因的序列的比对,我们发现了可能具有编码大环氧化修饰酶
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生二素链霉菌能够合成大环内酯类抗生素螺旋霉素。负责螺旋霉素生物合成的基因序列大部分已经被测序,通过对一些功能基因的序列的比对,我们发现了可能具有编码大环氧化修饰酶功能的两个基因orfl和orf31;可能编码负责N-二甲基转移酶功能的两个基因orf1*c和orf9c。在本实验中,我们首先确定了生二素链霉菌本身拥有的两种抗性,选择得到了大肠杆菌E. coli S17-1-生二素链霉菌的高效转移体系。挑选得到了包含螺旋霉素生物合成有关的基因片段的文库。得到了基因倍增突变株S.pSET-orfl, S.pSET-orfl*c和S.pSET-orf31,其中S.pSET-orf1*c和S.pSET-orf31突变株削弱了对m/z为875杂质的生产能力,S.PSET-orfl突变株只在一定程度上减少了螺旋霉素整体的生产能力。得到基因敲除突变株L-D1, L-D1*c, L-D9c和L-D31, L-D9c得到了m/z为815的中间代谢物,其他的三株敲除突变基本上丧失了对螺旋霉素及一些相关代谢物的生产能力。
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