目的：常规治疗缺血性心脏病的手段如冠状动脉腔内 介入治疗和冠状动脉旁路手术仅对内径 2mm以上心外膜血 管病变的治疗效果较佳，而解决2mm以下血管及心肌灌注 血管病变相当困难。A 型血管内皮生长因子(VEGF-A)作 为一种强有力的血管生长介质，不仅能特异性地作用于血 管内皮细胞，刺激细胞分裂、增生和移行，而且在血管成 熟和重塑中均具有重要作用，从而达到治疗性血管新生的 目的。载体的转染效率在基因转移中有至关重要的作用， 腺病毒载体因其转染特性而在心肌基因治疗中具有重要地 位。本实验研究以腺病毒为载体的血管内皮生长因子165 在诱导缺血心肌血管新生方面的有效性，以及载体和生长 因子是否对机体产生不良影响。 方法：将雄性新西兰白兔随机分成两组，行右股动脉 离断术后，于缺血骨骼肌内注入以腺病毒(Ad)为载体的 血管内皮生长因子165(VEGF165)互补DNA(cDNA)或对 照剂磷酸盐缓冲液 (PBS，0．1M，PH7．4), 注射后立即(第 0天)或术后第1，3，5，7天取注射部位肌肉和血浆用酶 联免疫分析法(ELISA)检测 VEGF165蛋白表达。小型猪 3 硕士研究生毕业论文Ad－VEGF165诱导心肌血管生成及其安全性研究 予胸廓切开术后将缩窄器置于左冠状动脉回旋支亿CX）近 端。3周后随机分成两组，再次行胸廓切开术并将以Ad为 载体的 VEGF165 CDNA（Ad－VEGF165）（fi＝6）或对照剂以 Ad 为载体的D－半乳糖酶。DNA（Ad－Gal，n＝6）直接注入LCX分 布区的缺血心肌内，喂养4周。以心电图门控单光子发射 计算机断层KPECT）显像检测心肌灌注和功能，离体冠状 动脉造影检测侧枝血管生成，免疫组织化学检测血管密度 和VEGF人阳性细胞。于载体释放前（第0天）和释放后第1、 3、7、28天抽血行血常规、肝肾功能、心肌酶检测并行血 管、心肌、肝脏组织学检查以检测其安全性。 结果：Ad－VEGF 65注入缺血骨骼肌组织后24小时 达到表达高峰，l 周时降至基线水平，血浆及对侧健康肌 肉组织无目的基因表达。活体冠状动脉造影示回旋支狭窄 程度均在98％以上，治疗组基因转移前与对照组术后7周比 较，心肌缺血面积、缺血程度、左心室射血分数和局部室 壁运动无明显差别。与对照组和治疗组注射 M个EGF 165 之前相比，给予AdVEGF165 治疗4周后运动心肌缺血面 积分别减小65．0％（P＜0．01）和63．2％（P＜o．01），静息心 肌缺血面积减小 97．4％（P＜ 0．of）和 97．3％（P＜ 0．01），静 息最大缺血程度减小6o．1％（P＜O．01）和6二．2％（P＜o．01）， 左心室射血分数增加 27．6％（P＜0．of）和 36．6％（P＜0．01）， 局部室壁运动改善 2．8仔wt 0．05）和 2．60＜0．05）级。以 RentroP为分级标准，离体冠状动脉造影示治疗组侧枝血 管较对照组高 2．6 级k t 0．05厂 血管密度检测示治疗组 侧枝血管明显多于对照组（10．8士3．8 ys 2．9士0．3，P＜ 0．01人 对照组和治疗组血常规、肝肾功能和心肌酶检测 示仅第 28天时红细胞计数卜7．2士0．9）X 10‘＊ VS o．9 上0．7）X 10‘VL，Pwt 0．05」和第 7 天时血尿素氮卜5．sl 2．1）mM v s（3．h 0．9）。M，P t 0．0 5」略有差别；与载体释 放前比较，两组均仅在第 1 天的肌酸磷酸激酶卜2625士 4 硕士研究生毕业论文Ad－VEGF165诱导心肌血管生成及其安全性研究 1212）U／L ys（269士98）U／L，（2063上1163）U／L VS（271 士171）U／L，Pwto．05）和谷草转氨酶【（105．9土62．1）U／L VS （35．9土14．2）U／L，（61．0土18．6）U／L ys（26．8土6．5）U／L， P＜0．05」有短暂升高。组织学检测LCX未见动脉粥样硬化 斑块形成和和内膜增厚，肝脏未见炎症反应，对照组和治 疗组（面积均小于 10啡各有 1 只动物见小面积心肌梗死， 未见炎症反应。免疫组织化学分析仅见治疗组1 只动物存 在小面积VEGP165阳性细胞。 结论：缺血肌肉组织中直接注入 AdVEGF 65可诱导 局部 VEGF 65蛋白表达，而且时间短暂。直接心肌注射 Ad个EGF165可诱导冠状动脉侧枝血管形成、改善心肌灌注 和功能并且相当安全，表明该方法有望成为一种治疗缺血 性心脏病的新方法。