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目的:通过观察济生肾气汤联合恩替卡韦治疗乙肝肝硬化脾肾阳虚型患者的一般情况、安全性以及对患者肝功能、骨髓造血功能的影响,并深入观察济生肾气汤联合骨髓间充质干细胞移植对肝硬化大鼠治疗作用的分子机制,探讨“补肾生髓法”方药济生肾气汤对改善造血功能、改善肝功能的中西医理论依据与现代实验医学的相关性。方法:(1)临床研究:将符合实验纳入标准的60例脾肾阳虚型乙型肝炎肝硬化患者,按数字随机表法随机分为治疗组30例,对照组30例。其中对照组仅予恩替卡韦分散片抗病毒治疗,治疗组予济生肾气汤联合恩替卡韦分散片治疗,疗程均为3个月。疗程结束后观察2组患者症状评分、血常规、肝功能、血清促红细胞生成素在治疗前后的差异情况及不良反应。(2)动物实验:将63只健康SPF级SD大鼠随机分出5只大鼠待处死后取材骨髓间充质干细胞进行细胞培养,8只作为空白组,剩余50只大鼠采用四氯化碳联合乙醇、橄榄油配合高脂饮食的复合因素造模方法,共诱导8W复制肝硬化大鼠模型,其后随机选择2只大鼠处死,行肝组织活检病理切片以证明肝硬化造模成功。造模成功后将存活的48只大鼠随机分为模型组、单用中药组、单用BMSCs移植组、BMSCs移植联合中药高剂量组、BMSCs移植联合中药中剂量组、BMSCs移植联合中药低剂量组。空白组仅予蒸馏水灌胃;模型组不予任何干预;单用BMSCs移植组予单予BMSCs移植;BMSCs移植+中药高剂量组予BMSCs移植+“济生肾气汤”混悬液高剂量灌胃;BMSCs移植+中药中剂量组予BMSCs移植+“济生肾气汤”混悬液中剂量灌胃;BMSCs移植+中药低剂量组予BMSCs移植+“济生肾气汤”混悬液低剂量灌胃,均为每日1次,BMSCs移植为每周1次,从第8W末起,连续4W,至12W末。干预疗程结束后,观察干预后7组大鼠肝脏组织病理学情况;使用全自动生化分析仪测定各组大鼠肝功能(ALT、AST、ALB、TBIL);ELISA法检测各组大鼠外周血EPO、GCSF、IL-3、IL-6、HGF、SCF水平;Western blot法检测各组大鼠肝组织中PI3K、Akt、Jak1、STAT蛋白的表达。结果:(1)临床研究:实验过程因未规律服用药物、患者个人因素自动要求退出等原因剔除2例,最终实际有效病例为58例。疗程结束后,治疗组的症状评分、血常规、肝功能及血清促红细胞生成素较治疗前均有所改善(P<0.01),对照组的症状评分、血常规、肝功能较治疗前均有所改善(P<0.01),而对照组治疗前后的血清促红细胞生成素无明显差异(P>0.05);与对照组相比,治疗组肝硬化患者的症状评分、血常规、肝功能及血清促红细胞生成素均有明显改善(P<0.01或P<0.05)。在实验过程中,两组患者均未出现不良反应。(2)动物实验:大鼠一般情况:经干预治疗后,单用BMSCs移植组、单用中药组、BMSCs移植联合中药高剂量组、BMSCs移植联合中药中剂量组及BMSCs移植联合中药低剂量组的大鼠精神状态、营养状况及活动量等情况均比干预前有不同程度的改善,其中BMSCs移植联合中药高剂量组及BMSCs移植联合中药中剂量组大鼠改善的情况明显。各组大鼠肝组织HE染色变化:模型组肝组织病理呈重度纤维化,假小叶形成,广泛的肝细胞变性及坏死,表明肝硬化造模成功。经干预治疗后,各治疗组大鼠的肝脏病理情况均存在不同程度的改善,以BMSCs移植联合中药高剂量组和BMSCs移植联合中药中剂量组肝硬化大鼠肝脏病理情况改善最明显,BMSCs移植联合中药低剂量和单用BMSCs移植组改善情况次之,但均优于单用中药组。各组大鼠肝功能:与空白组相比,模型组ALT、AST及TBIL水平明显升高、ALB水平明显下降(P<0.01);与模型组相比,各治疗组ALT、AST及TBIL水平均有不同程度下降,ALB水平均有不同程度升高(P<0.01);各治疗组相比,BMSCs移植+中药高、中剂量组降低ALT、AST效果相比,差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠外周血EPO、GCSF、IL-3、IL-6、HGF、SCF的变化:与空白组相比,模型组EPO、G-CSF、HGF、SCF及IL-3水平明显下降,IL-6水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,各治疗组EPO、G-CSF、HGF、SCF及IL-3水平均有不同程度升高,IL-6水平均有不同程度下降(P<0.01);各治疗组相比,BMSCs移植+中药高剂量组升高EPO、IL-3、G-CSF、HGF,降低IL-6效果最佳,BMSCs移植+中药中剂量组次之(P<0.01或P<0.05);BMSCs移植+中药低剂量组与BMSCs移植+中药中剂量组升高G-CSF、HGF效果相比,差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠肝组织中PI3K、Akt、Jak1、STAT蛋白的表达:与空白组相比,模型组肝组织中PI3K、Akt、Jak1、STAT蛋白表达量明显上升,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,各治疗组肝组织中PI3K、Akt、Jak1、STAT蛋白表达量均有不同程度下降(P<0.01);其中BMSCs移植+中药高剂量组与BMSCs移植+中药中剂量组PI3K、Akt、Jak1、STAT蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);BMSCs移植+中药低剂量组与单用BMSCs移植组PI3K、Akt、Jak1、STAT蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);BMSCs移植+中药高、中剂量组PI3K、Akt、Jak1、STAT蛋白表达量均低于其他治疗组,差异有统计学意义(P<0.01);BMSCs移植+中药低剂量组及单用BMSCs移植组PI3K、Akt、Jak1、STAT蛋白表达量低于单用中药组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:临床实验显示,应用恩替卡韦联合济生肾气汤治疗乙肝肝硬化脾肾阳虚证患者,其对临床症状、肝功能、血常规、血清EPO及骨髓造血均有一定改善作用。动物实验显示,BMSCs移植联合济生肾气汤治疗可以对肝硬化大鼠的一般情况、肝功能、肝脏炎症反应、肝纤维化程度均有不同程度的改善,且可促进骨髓造血及BMSCs的迁移,这与改善EPO、SCF、G-CSF、HGF、IL-3、IL-6分泌相关,下调P13K、Akt、Jak1、STAT蛋白表达有关,本实验还表明,BMSCs移植+中药高剂量组治疗肝硬化大鼠上效果最佳,BMSCs移植+中药中剂量组效果次之,均优于其他治疗组。