【摘 要】
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目的:饲养层制备及复苏培养胚胎干细胞,探索体外诱导胚胎干细胞向心肌样细胞分化的诱导方法。 方法: 1、昆明小鼠胚胎成纤维细胞分离培养及饲养层的制备。 2、129纯
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目的:饲养层制备及复苏培养胚胎干细胞,探索体外诱导胚胎干细胞向心肌样细胞分化的诱导方法。
方法:
1、昆明小鼠胚胎成纤维细胞分离培养及饲养层的制备。
2、129纯系小鼠ESC系(ES-D3)的复苏及体外培养。37℃快速复温冻存细胞,吸细胞悬液加入离心管,以1000rpm,离心5min,重悬细胞,接种于饲养层上,待胚胎干细胞长至70％～80％汇合后,按1:3～4传代。
3、胚胎干细胞诱导方法,采用一步法,消化贴壁胚胎干细胞,以5～7×105个/ml细胞接种于90mm细菌培养皿中,悬浮培养5d,形成拟胚体,将拟胚体接种于明胶上,待其贴壁后,加入含10-7mol/k,淫羊藿苷诱导液对其诱导并每天观察。
结果:胚胎干细胞悬浮聚集5d,形成类似球状的拟胚体,将拟胚体贴壁诱导8d,发现拟胚体中出现跳动,诱导后10d拟胚体跳动率达65％,显著高于空白对照组和阴性对照组,一个分化拟胚体中一般出现1～3个跳动点,节律约为50～80times/min。
结论:胚胎干细胞经悬浮聚集培养5d,形成拟胚体贴壁后,再经10-7mol/L,淫羊藿昔诱导,得到了可以跳动的心肌样细胞团。
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