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Sox2基因作为维持胚胎干细胞自我更新与全能性的关键基因,最近几年其一直是干细胞研究的热点。本研究旨在克隆鸡Sox2基因,利用原核表达技术获得纯化的His-Sox2融合蛋白,以此为抗原制备鸡Sox2多克隆抗体并检测其特异性和有效性。从20日龄鸡的睾丸组织中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增Sox2基因编码序列,并将其克隆到pMD18-T载体。对确定的阳性质粒进行生物信息学分析,限制性酶切获得的Sox2片段亚克隆到pET30-a表达载体,构建原核表达载体pET30a-Sox2。该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,用SDS-PAGE电泳及Western blotting检测融合蛋白表达。优化表达条件,大量增菌,1.0mmol/L IPTG37℃诱导4h,以Ni-NTA argrose介质在变性条件下分离纯化His-Sox2融合蛋白。纯化的融合蛋白间隔2周,分4次皮下多点注射新西兰大白兔。最后一次注射后7d,采血分离血清,并以此为第一抗体,分别以纯化的His-Sox2融合蛋白和来自小鸡睾丸组织的蛋白样品作为抗原,借助于Western blotting检测其特异性。于此同时,采集新生公鸡睾丸组织制备石蜡切片,仍然用上述多克隆抗体作为第一抗体,借助于免疫组化方法检测Sox2基因在睾丸组织中的表达,进一步证明其特异性。结果表明：(1)本试验克隆的鸡Sox2基因开放阅读框由963个核苷酸组成,共编码320个氨基酸；该序列与已公布的鸡Sox2(U12532.1)核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为95.8%和98.7%。(2)经Signal P3.0预测,在该基因氨基酸序列的N端不存在信号肽的切割位点,其全长ORF可用于构建原核表达载体。(3)在优化的诱导表达条件下,pET30a-Sox2重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中得以高效表达。(4) Western blotting分析认定,纯化的His-Sox2融合蛋白能与His标签抗体特异性结合,从接受免疫的新西兰大白兔获得了鸡Sox2多克隆抗体。(5) Western blotting分析表明,该多克隆抗体能与His-Sox2融合蛋白和小公鸡睾丸组织中固有的Sox2蛋白特异性结合。(6)免疫组化分析显示,该多克隆抗体还能与鸡睾丸组织中曲精小管内皮细胞和少量间质细胞中表达的Sox2蛋白发生反应,进一步证明了鸡Sox2多克隆抗体的有效性和特异性。总而言之,本研究克隆了鸡Sox2基因,成功构建了pET30a-Sox2重组质粒；获得了His-Sox2融合蛋白,制备了高特异性鸡Sox2多克隆抗体。本实验为深入研究Sox2基因的生物学功能奠定了基础,同时为进一步研究鸡多能性干细胞(如iPS细胞)的自我更新机制创造了条件。