论文部分内容阅读
实验室前期研究表明,将来自水稻黄单胞菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)的Harpin蛋白编码基因hrf1转化水稻,获得的转基因株系NJH12能够提高对水稻稻瘟病、水稻白叶枯病和干旱的抗性。对NJH12表达芯片进行分析,筛选出大量与受体植株有显著差异表达的基因。OsSsrl (Oryza sativa L. salt-sensitive related gene1, GeneBank登录号为NM001065574)是NJH12表达谱中的一个表达量上调基因,为了进一步分析其序列特征、启动子序列、亚细胞定位及在水稻不同组织和各种逆境胁迫下的表达模式,通过生物信息学手段、洋葱表皮亚细胞定位和Real-Time PCR对其进行研究。序列分析表明OsSsr1的开放阅读框为2004bp,编码一个由667个氨基酸组成并含有5个跨膜区的蛋白,该蛋白N端含有一个信号肽。其启动子序列包含TGACG-motif、ABRE、 TCA-element、Box-W1、W box和Box S等多个与胁迫相关的顺式作用元件。GFP融合表达显示,OsSsrl蛋白定位于细胞膜。Real-Time PCR结果表明,OsSsrl基因在水稻不同不同组织中均有表达,在叶部的表达量最高,其次为根,在幼穗中的表达量最低;OsSsrl表达水平受干旱、高温、高盐、低温、机械伤害、稻瘟病菌、MeJA和ABA的诱导上调。Os02g0198200基因也是NJH12表达谱中的一个表达量上调基因,具有2个EF手型结构,编码1个EF手型钙结合蛋白。本研究成功构建Os02g0198200基因沉默表达载体,用土壤根癌农杆菌介导的方法将过表达载体和沉默表达载体转化水稻日本晴,用Hpt抗生素做抗性筛选,获得19株过表达植株和21株沉默植株。PCR检测表明Os02g0198200基因已经整合到水稻基因组中,RT-PCR分析表明该基因在水稻中可以正常表达。对TO代阳性转基因水稻进行PXO99接种,发现过表达株系在孕穗期提高了对白叶枯病菌的抗性,不同株系对水稻白叶枯的抗性存在差异;沉默株系没有增强对PXO99的感病性;在未接菌条件下,过表达株系OV1中防卫反应相关基因表达量升高,表明过表达Os02g0198200基因激活了防卫反应相关基因的表达,过表达株系对白叶枯病菌的抗性可能与防卫反应相关基因的激活有关。