论文部分内容阅读
背景：高脂血症为内科临床常见病、多发病,主要表现为总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高,伴或者不伴有高密度脂蛋白水平降低,可严重损害人体的心血管系统,是冠心病、动脉粥样硬化的危险因素。西药降脂药物对本病有一定的疗效,但也存在如肝、肾功能异常、肌毒性等不良反应。化浊祛湿方针对高脂血症形成的源头“湿浊”先证用药,前期大量临床研究显示能有效降低血清CHOL水平。最新研究热点的肝脏脂代谢调控中心,包括SREBP-2基因其下游HMGCR、LDLR、PCSK9基因等是调节CHOL代谢的靶基因,因此我们推测化浊祛湿方调节胆固醇代谢的作用机制是通过SREBP-2基因及相关靶基因实现的。为此,本研究拟从血清生化、组织病理改变、基因表达等方面进一步探讨化浊祛湿方调节胆固醇代谢的基因靶点及分子机制,为脂代谢紊乱早期广泛应用化浊祛湿方截断病势提供有效依据。目的：观察化浊祛湿方对高脂血症SD大鼠模型血清胆固醇及肝肾功能的影响；观察化浊祛湿方对肝内脂质含量影响；探讨化浊祛湿方调节胆固醇代谢的作用机制。方法：96只SD大鼠随机抽取18只最为空白组,普通饲料饲养,其余78只大鼠均以高脂饲料饲养。饲养4周后,所有大鼠目内眦取血检查血脂水平,确认造模是否成功。造模成功后依据血脂水平,将78只高脂饲料饲养的大鼠随机分为模型组18只、辛伐他汀组12只、绞股蓝组12只、化浊祛湿方低剂量组12只、化浊祛湿方中剂量组12只及化浊祛湿方高剂量组12只,各组均高脂饲料饲养至实验结束。造模成功后,采用经口灌胃的方式对大鼠进行药物干预。其中,空白组和模型组给予高纯水,辛伐他汀组给予配置的辛伐他汀片灌胃溶液,绞股蓝组给予配置的绞股蓝总甙片灌胃溶液,化浊祛湿方低剂量组给予配置的化浊祛湿方低剂量灌胃溶液,化浊祛湿方中剂量组给予配置的化浊祛湿方中剂量灌胃溶液,化浊祛湿方高剂量组给予配置的化浊祛湿方高剂量灌胃溶液。各组均按照每100g体重1m1容量称取,每天灌胃1次,连续12周。每日测量所有大鼠体重,并每周记录一次体重；分别于造模4周后和药物干预第4、8、12周后取血,利用全自动生化分析仪检测CHOL、LDL-C、HDL-C、VLDL水平,第12周时检测ALT、AST、 BUN、Cr等安全性指标；造模成功后,空白组和模型组随机各抽取4只大鼠,获取肝脏组织,药物干预第12周后,每组随机抽取各4只大鼠,获取肝脏组织,采用油红0染色法光学显微镜下观察不同组间肝内脂质含量的差异。药物干预第12周后,每组随机抽取大鼠各6只,获取肝脏组织,采用Real-time PCR技术检测SREBP-2基因及其下游HMGCR、PCSK9、LDLR基因的表达。结果：(1)血脂水平及肝肾功能：从药物干预第8周开始,化浊祛湿方中剂量组就显示出良好的降低血清CHOL效果,与模型组比较血清CHOL水平明显降低(P<0.05),与空白组比较血清CHOL水平与之无明显差异(P>0.05)。药物干预第12周后,辛伐他汀组、化浊祛湿方低剂量组、化浊祛湿方中剂量组、化浊祛湿方高剂量组均显示出良好的治疗效果,血清CHOL水平与空白组比较无明显差异(P>0.05),且与模型组比较,化浊祛湿方低剂量组、化浊祛湿方中剂量组、化浊祛湿方高剂量组血清CHOL水平明显降低(P<0.05)。药物干预12周后,除化浊祛湿方高剂量组外,各治疗组血清LDL-C水平改善均不明显；药物干预12周后,除绞股蓝组外,各治疗组血清VLDL水平均明显改善。药物干预12周后,各组血清HDL-C、ALT、AST、BUN、Cr水平均无明显变化。(2)组织病理改变：药物干预12周后,肝组织油红0染色证实,除绞股蓝组外,其余各治疗组大鼠肝细胞油红0染色结果介于正常组与模型组之间,大鼠肝细胞肿胀减轻或消失,细胞核呈蓝色,细胞内脂滴面积变小、数量减少,或仅含少量脂滴,其中以辛伐他汀组和化浊祛湿方中剂量组大鼠肝细胞脂滴含量与正常组最为接近。(3)基因表达水平：药物干预第12周后,在SREBP-2 mRNA表达方面,绞股蓝组>化浊祛湿方高剂量组>辛伐他汀组>空白组>化浊祛湿方低剂量组>化浊祛湿方中剂量组>模型组。与空白组比较,模型组具有统计学差异(P<0.05),其余各组均不具有统计学差异(P>0.05)。在HMGCR mRNA表达方面,绞股蓝组>化浊祛湿方高剂量组>辛伐他汀组>空白组>模型组>化浊祛湿方中剂量组>化浊祛湿方低剂量组。与空白组比较,化浊祛湿方低剂量组、化浊祛湿方中剂量组具有统计学差异(P<0.05),其余各组均不具有统计学差异(P>0.05)。在PCSK9 mRNA表达方面,空白组>辛伐他汀组>化浊祛湿方高剂量组>绞股蓝组>化浊祛湿方中剂量组>化浊祛湿方低剂量组>模型组。与空白组比较,模型组、化浊祛湿方低剂量组、化浊祛湿方中剂量组具有统计学差异(P<0.05),其余各组均不具有统计学差异(P>0.05)。在LDLR mRNA表达方面,辛伐他汀组>绞股蓝组>化浊祛湿方低剂量组>化浊祛湿方中剂量组>化浊祛湿方高剂量组>模型组>空白组,与空白组比较,各组均不具有统计学差异(P>0.05)。结论：化浊祛湿方可以有效降低血清CHOL水平,可能与抑制SREBP-2 mRNA及其信号通路中HMGCR mRNA表达,阻止胆固醇合成有关。路志正教授用调理脾胃祛湿化浊法,针对痰湿中阻、运化失常等内伤脾胃病理机制,在痰湿尚未形成之前,对痰湿的源头进行早期干预,加强脾胃运化,从源头治起,阻止胆固醇过多合成,实际上是将高脂血症的治疗前移,防止疾病的进一步发展,是中医既病防变、治未病学术思想的具体体现,为高脂血症的临床治疗提供一种思路。