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背景及目的： 肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)恶性程度高,具有高复发转移率,严重影响着其远期疗效,因此需要寻找新的治疗手段来有效地降低其复发转移。转化生长因子βⅡ型受体(TransforminggrowthfactorbetatypeIIreceptor,TGFβRII)基因在多种肿瘤中缺失或突变,导致其分子表达缺失或失活与肿瘤发生、发展及转移等特征密切相关。本实验通过构建能在体内长期稳定表达TGFβRⅡ的重组腺相关病毒(RecombinantAdeno-AssociatedVirus,rAAV)载体,选用人肝癌高转移潜能细胞株MHCC97H建立裸鼠模型,观察介导TGFβRⅡ基因的rAAV对肝癌的生长和转移产生的影响,探讨TGFβRⅡ基因在肝癌生长和转移过程中的作用,并可能为肝癌的基因治疗提供新的靶点。 方法： 1.构建pAAV-TGFβRⅡ-IRES-ZsGreen载体,并制备介导TGFβRⅡ基因的rAAV。 2.选用人肝癌高转移潜能细胞株MHCC97H建立人肝癌裸鼠原位移植瘤转移模型。 3.接种7天后,随机将裸鼠分成3组,按每组给予相应治疗试剂不同分别标记为PBS组、rAAV-ZsGreen组、rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen组,每组裸鼠通过门静脉注入相对应的试剂,0.2ml/只,观察各组裸鼠生长状况。 4.经治疗30天后处死裸鼠提取标本,测量各组裸鼠肝脏原位移植瘤体积,观察肿瘤的肝内外转移、rAAV在裸鼠肝脏中的转导效率以及肿瘤组织的病理学变化情况;Western-blot检测原位种植瘤组织中TGFβRⅡ蛋白表达情况。 结果： 1.成功构建了携带TGFβRⅡ基因的pAAV-TGFβRⅡ-IRES-ZsGreen载体,并制备滴度为3.13x1013vg/ml的高滴度rAAV。 2.选用MHCC97H建立的人肝癌裸鼠原位移植瘤转移模型,各组成瘤率及PBS组肿瘤肝内外转移率均为100％。 3.每组裸鼠体重随时间变化与处理方式无关(P>0.05),而每组裸鼠体重的时间效应具有统计学意义(P<0.05)。 4.rAAV-ZsGreen组及rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen组裸鼠肝内稳定表达绿色荧光;rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen组裸鼠原位移植瘤的肝内外转移率均小于PBS组、rAAV-ZsGreen组,差异具有统计学意义(P<0.05);rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen组肝脏原位移植瘤体积均小于PBS组、rAAV-ZsGreen组(P<0.05);rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen组裸鼠原位移植瘤组织中TGFβRⅡ蛋白表达水平明显高于PBS组、rAAV-ZsGreen组,差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论： 1.成功构建了携带TGFβRⅡ基因的rAAV载体,并制备高滴度rAAV。 2.rAAV介导TGFβRⅡ基因可在裸鼠肝内长期稳定高效表达。 3.rAAV介导TGFβRⅡ基因对肝癌的生长和转移产生明显的抑制作用,提示TGFβRⅡ基因在肝癌生长和转移机制中具有抑癌功能。