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背景:炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一组肠道炎症疾病,病程迁延反复,严重影响了患者的生活质量。IBD的发病机制还没有彻底研究清楚,目前认为由多因素之间相互作用造成的,主要包括环境、感染、遗传、免疫等因素。IBD是当今临床治疗的一个重大医学难题,目前仍然缺乏有效的治疗措施。随着再生医学的兴起,干细胞疗法起着越来越重要的作用。人孤雌胚胎干细胞(human parthenogenetic embryonic stem cells,hPESCs)在分化能力上和胚胎干细胞类似,具有分化的全能性,且避免了伦理道德的争议,在IBD的治疗中有着很大的潜力。本实验研究的是人孤雌胚胎干细胞向肠上皮干细胞(intestinal epithelial stem cells,IESCs)分化的过程。目的:对hPESCs体外定向诱导分化为IESCs的可行性进行初步探索,为IBD患者提供一条更加切实可行的治疗手段。方法:1)建立hPESCs/MEF、hPESCs/hFF、hPESCs/3T3-L1三种体外培养体系,通过形态学观察和碱性磷酸酶法检测hPESCs能否稳定生长并保持未分化状态。2)使用诱导因子Activin A诱导hPESCs向限定性内胚层(definitive endoderm,DE)分化。通过检测Sox17、Gsc和E-Cad的表达来判断诱导细胞是否转化为DE。3)使用表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导DE向IESCs分化。通过检测Musashi1和Hes1的表达来判断诱导DE细胞是否转化为IESCs。结果:1)hPESCs在hPESCs/MEF、hPESCs/hFF、hPESCs/3T3-L1三种培养体系中生长状态良好。在经过超过60代的体外培养之后,仍能保持未分化的状态。2)DE标记物Sox17、Gsc和E-Cad在诱导组的表达显著高于对照组,在第4d的表达量达到峰值。3)IESCs标记物Musashi1和Hes1在诱导组的表达量显著高对照组,在第5d的表达量达到了峰值。结论:1)hPESCs/MEF、hPESCs/hFF、hPESCs/3T3-L1三种培养体系可有效扩增hPESCs并维持其未分化状态。2)Activin A可成功诱导hPESCs分化DE。3)EGF可成功诱导DE分化为IESCs。4)经分阶段诱导法,成功将hPESCs向IESCs发生分化。