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[目的]
研究STAT3及相关基因在鼻咽癌中的表达;研究STAT3信号通路阻滞剂AG490对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制;探讨EB病毒LMP1基因对鼻咽癌细胞增殖凋亡和STAT3表达的影响。
[方法]
1.采用免疫组化SP法检测45例鼻咽癌、27例鼻咽粘膜慢性炎组织中LMP1、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)和Survivin蛋白的表达。
2.体外培养人低分化鼻咽癌细胞系CNE2-Z、人高分化鼻咽癌细胞系CNE1及转染了EB病毒LMP1基因的CNE1细胞-CNE1-GL细胞,不同剂量的STAT3抑制剂AG490作用于鼻咽癌CNE2-Z细胞。通过绘制细胞生长曲线、平板克隆形成实验、MTT法检测细胞增殖;流式细胞术、Hoechst33342/PI双荧光活染法检测细胞凋亡;RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学方法检测 STAT3、Survivin和Mcl-1等基因的表达。
[结果]
1.免疫组化结果显示,鼻咽癌组织中LMP1、STAT3、p-STAT3和Survivin蛋白的阳性率均高于鼻咽粘膜慢性炎组织(P<0.01)。相关分析结果显示,LMP1和p-STAT3、STAT3和Survivin、STAT3和p-STAT3表达之间呈正相关关系(γ值分别为0.302、0.318和0.328,P<0.05)。
2.与CNE1细胞相比,CNE1-GL细胞生长加快,克隆形成能力增强,STAT3活化程度增加,Survivin基因表达上调,但细胞凋亡率及Mcl-1表达无明显变化。
3.AG490可明显抑制CNE2-Z细胞生长,使细胞克隆形成能力减弱,凋亡率增加,STAT3活化程度降低,Survivin、Mcl-1基因表达下调。
[结论]
1.鼻咽癌中存在STAT3蛋白高表达和持续激活,STAT3可能通过调节Survivin基因表达参与鼻咽癌的发生发展,LMP1基因可能参与STAT3的活化。
2.EB病毒LMP1基因导入可使CNE1细胞生长加快,STAT3活化程度增加,对细胞凋亡无影响。
3.阻断STAT3信号通路可抑制CNE2-Z细胞增殖,并可能通过下调凋亡抑制基因Survivin、Mcl-1表达,使细胞凋亡增加。