乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)属嗜肝DNA病毒科,为不完全环状双链DNA病毒。完整的HBV颗粒为42nm大小的球形颗粒,即Dane颗粒。HBV是目前已知的对人类致病的最小DNA病毒,基因组全长约3.2kb。HBV有四个主要的开放读码框,分别称为S区、C区、P区、X区,有些区是重叠的,HBV这种利用基因组DNA的遗传信息的高效性在自然界中是罕见的。HBV复制过程中要经过逆转录,由于逆转录酶缺乏有效的碱基校对功能,故HBV基因组比一般DNA病毒易发生变异。这给疾病的预防、诊断、治疗和预后带来新问题。 本实验采用裂解液煮沸法提取血清中HBV DNA。该法经过改良后,与碱裂解法和经典的苯酚法进行了效果比较,证实了本改良法具有快速、简便、高效等特点。本研究参照GenBank中的HBV基因组序列,用PrimerPremier5.0软件设计3条定义HBV基本核心启动子(basal core promoter, BCP)和前C区(precore, PreC)的特异性引物P1、P2、P3,进行半巢式PCR,扩增16例HBV DNA阳性血清,其中HBeAg阴性血清13例,HBeAg阳性血清3例(作对照)。将PCR产物纯化回收,克隆入pUCm-T载体,利用α互补筛选pUCm-HBV-403重组子,采用PCR和酶切重组子鉴定。通过测序和比对分析HBV BCP和PreC基因序列,发现BCP变异主要集中在TATA样盒的TA1、TA2、TA3,未见插入和缺失突变,与北京董菁的报道显著不同。TA4极为保守,TA4两处均未见变异。BCP中一个变异热点在nt1799位C→G,对于X蛋白来说是同义突变。PreC基因变异主要集中在nt1896位G→A,使第28位密码子TGG→TAG(终止子),它导致蛋白质翻译提前终止,使HBV不产生HBeAg。本次研究发现一例新奇的插入突变,发生在DR1(direct repeat sequence, DR)内,DR1和DR2在病毒复制和成环过程中起重要作用。 BCP和PreC基因变异可使HBeAg阴转,易使人们对体内HBV掉以轻心。某些BCP和PreC基因位点的变异,可引起严重的肝损害,有些位点的变异影响干扰素的疗效。为提高对HBV的诊治水平,人们应重视对HBV BCP和PreC基因变异的研究。