妊娠相关糖蛋白(Pregnancy-associated glycoprotein,PAG)是由胎盘组织产生并释放到母体外周血液中的大分子蛋白质,在妊娠过程中发挥着重要作用。目前,奶牛妊娠早期诊断的研究多集中在对奶牛伤害小、准确性高、特异性强的检测方法上,如检测血液或乳汁中孕酮等激素,而近年来发展起来的对血液中妊娠相关糖蛋白1(PAG1)的检测就是一种主流的方法。但目前已有的PAG1检测方法主要还是在实验室条件下进行的,与触诊和超声波检查法相比难以在养殖场现场独立完成。为了能够借鉴人医上早孕诊断方面取得的成果,开发出诸如早孕试纸条等类产品来准确、快速、简便的检测血清中的PAG1含量,首先需要得到特异性强的PAG1单克隆抗体,为下一步PAG1免疫胶体金试纸条的研制奠定基础。本实验研究内容和结果如下:(1)根据NCBI公布的牛PAG1氨基酸序列成功构建PAG1重组蛋白原核表达系统,挑选验证证正确的菌株大量表达纯化得到PAG1重组抗原。结果:经检测大肠杆菌表达的PAG1重组蛋白位置正确;(2)使用PAG1偶联抗原和PAG1重组抗原免疫新西兰大白兔,制备PAG1多克隆抗体。结果:ELISA检测抗体效价,获得PAG1多克隆抗体;(3)使用PAG1偶联抗原和PAG1重组抗原免疫SPF Balb/c雌性小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞,采用PEG法进行融合,筛选单克隆细胞。结果:最后筛选得到39株分泌抗体类型为IgG的单克隆细胞株,基本成功获得PAG1单克隆抗体。结论:原核系统成功表达PAG1蛋白,成功制备了针对PAG1不同抗原表位的PAG1的多克隆抗体和单克隆细胞株,为后续单克隆抗体的筛选配对工作奠定基础。