线粒体DNA 16srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增在法医学种属鉴定中的应用研究

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目的 本课题旨在构建一种新的线粒体DNA(mtDNA)16srRNA和ND4基因的荧光标记复合扩增检测体系,以期为法医学种属鉴定提供备选技术手段。方法 从GeneBank基因数据库中搜索并获得人和多种动物(包括猴、猪、狗、鱼、鼠、豚鼠、兔、马、鳝鱼、蛙、鸡、鸭、羊、牛等)的线粒体DNA序列,并利用基因数据库的序列分析软件,对人与上述动物的线粒体DNA序列进行同源性分析。利用引物设计软件(Primer5)对筛选出的两个mtDNA序列ND4基因和16srRNA基因设计两对引物,每对引物中的一条在5’端标记荧光素(6-FAM)。按传统复合扩增技术首先建立复合扩增体系,然后用ABI PRISM 310基因分析仪对产物进行分析,建立试验检测方法。用建立的检测方法对人及十四种不同的动物DNA进行复合扩增和检测,并对30例实验室存放5-15年的陈旧人血痕进行检测。结果本研究成功建立了mtDNAl6srRNA和ND4基因的荧光标记复合扩增体系。ABI PRISM 310基因分析仪对扩增产物进行检测时,人类DNA扩增产物出
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