论文部分内容阅读
目的:探究红景天甙对唾液腺腺样囊性癌抗肿瘤的药物作用。方法:选取人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-2作为体外实验对象体外培养24h,运用CCK-8法观察不同浓度红景天甙(0.125μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml)对SACC-2细胞增殖的抑制作用并计算红景天甙的IC50值;通过Transwell实验与划痕实验观察红景天甙对SACC-2侵袭、迁移能力的影响;运用TUNEL检测反映SACC-2细胞凋亡情况;并通过Western Blot实验观察SACC-2细胞内自噬相关蛋白LC3和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平的改变情况,进一步探究不同浓度红景天甙对体外培养SACC-2细胞凋亡的影响。体内实验以裸鼠为研究对象建立唾液腺腺样囊性癌细胞皮下荷瘤模型,设置组别为生理盐水组、5-Fu组、红景天甙组及联合用药组(5-Fu+红景天甙)四组,运用HE染色、免疫组织化学染色来反映红景天甙治疗后肿瘤细胞形态结构、增殖及凋亡水平的改变情况,并进一步探究红景天甙调控体内自噬相关蛋白LC3与及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平进而影响SACC-2细胞凋亡的相关作用机制。结果:1.CCK-8实验显示,梯度浓度的红景天甙能够在不同程度上抑制SACC-2细胞的增殖生长,且抑制作用随红景天甙浓度的升高而逐渐增大,其IC50值为5.07±0.91μg/ml。2.Transwell实验及划痕实验显示,与对照组相比,5μg/ml的红景天甙能够显著减少穿孔细胞数量(P<0.01),延长划痕愈合时间(P<0.05),降低了SACC-2细胞的迁移、侵袭能力。3.TUNEL检测可观察到,随红景天甙浓度升高,蓝绿色荧光强度逐渐增强,SACC-2细胞的凋亡水平逐渐上升。Western Blot实验则显示,与对照组及2.5ug/ml红景天甙组相比,5ug/ml红景天甙组的Bcl-2及Bax表达水平降低极为显著,其Bcl-2/Bax比值及LC3-II/I比值则明显上升。4.体内研究HE染色显示,5-Fu处理组、红景天甙处理组及联合用药组的肿瘤细胞形态改变,细胞核异型性减小,胞核浅染,其中联合用药组核染色最浅,细胞核异型性最小;免疫组织化学染色检测显示,红景天甙或/和5-Fu处理后,肿瘤组织内细胞Ki-67的表达水平下降,细胞增殖能力减弱,其中联合用药组内细胞的Ki-67最少,阳性表达水平最低。5.体内研究免疫组织化学染色结果显示,与生理盐水组相比,联合用药组组织内抗凋亡蛋白Bcl-2阳性表达水平显著降低(P<0.01),促凋亡蛋白Bax阳性表达水平则明显上升(P<0.05);此外,相较生理盐水组,联合用药组组织内自噬相关蛋白LC3的表达水平同样上调明显(P<0.05)。结论:1.红景天甙对SACC-2细胞增殖具有抑制作用。2.红景天甙能够抑制SACC-2细胞的迁移和侵袭能力。3.红景天甙对SACC-2细胞增殖的抑制作用是通过促进细胞凋亡实现的,其作用机制与细胞凋亡的线粒体途径和细胞自噬相关。