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鹅副粘病毒病又称鹅源新城疫,是由鹅副粘病毒(Goose Paramyxovirus,GPMV)引起的一种急性、烈性传染病。该病以鹅消化道和呼吸道病变为主要特征,具有高度的发病率和死亡率,给养鹅业带来了严重的危害。由于目前我国对鹅副粘病毒病的危害性缺乏足够重视,尚缺乏完善的疾病诊断、监测技术。面对该病在我国有逐步扩大的趋势,开展鹅副粘病毒病的诊断和检测技术的研究迫在眉睫。在血清学的临床检测方面,目前已经有多次关于鸡新城疫ELISA与HI检测比较的报道,然而对于鹅副粘病毒病却未见这方面的报导。本研究以NP蛋白为检测抗原对鹅副粘病毒病进行了ELISA与HI检测抗体相关性的比较。
GPMV属于副粘病毒科,副粘病毒亚科,腮腺炎病毒属,禽副粘病毒(Avian ParamyxovimsAPMV)Ⅰ型中的成员,具有基因Ⅶ型新城疫(NDV)的典型特征。NP蛋白是鹅副粘病毒核衣壳的主要结构蛋白,在自然感染或者疫苗免疫后的动物中都可以产生针对NP蛋白的抗体,具有重要的诊断价值。本研究通过原核表达载体pET-30a,成功构建了重组质粒pET-30a-NP,并通过大肠杆菌表达系统原核表达GPMV-NP蛋白。以纯化的NP蛋白为包被抗原建立了ELISA检测方法,通过对各个反应条件的优化,最终确定了最佳反应条件。
本实验选取50只来源于肇东非疫区的鹅,随机分为A、B、C、D 4组。A组为非免疫对照组;B组为免疫组;C组为免疫攻毒组;D组为人工感染组。分别在第一次免疫前、免疫后及攻毒后第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、18周采血。对上述血清进行ELISA定量检测及HI抗体的检测。比较各组鹅群NP蛋白ELISA抗体和HI抗体的相关性,分别建立了相关的回归方程。免疫组:ELISA=0.1981 HI+0.054.1(r=0.9134,P<0.05);免疫攻毒组:ELISA=0.1807 HI-0.0744(r=0.8240,P<0.05);人工感染组:ELISA=0.2728 HI-0.4498(r=0.8795,P<0.05)。对各组ELISA与HI的敏感性进行比较的结果显示,ELISA检测敏感性均高于HI方法。结果表明:GPMV两种检测方法所测得抗体之间呈显著相关,该结果为ELISA检测方法取代HI试验提供了理论依据。
本研究对鹅副粘病毒两种检测方法作了初步实验室探索,而在实际临床检测中,能否采用NP蛋白为包被抗原的ELISA检测方法代替传统的HI试验还有待大量动物实验的验证。从而为深入研究GPMV的临床检测提供一定依据。