免疫毒素是一种靶向毒性蛋白,它是抗体或细胞因子携带毒性蛋白特异性结合到靶向细胞表面,通过催化作用抑制蛋白质合成而杀死靶细胞。对于免疫毒素它必须具备细胞特异性结合和内化作用。通过基因重组技术,一些抗体、小分子的生长因子和细胞因子也被用作与无细胞结合能力的毒性蛋白质连接,把毒素带到特定癌细胞表面,特异性杀伤癌细胞,在过去的十年里,有大量各种各样的重组免疫毒素在细胞水平、动物模型水平和临床水平测试其抗肿瘤效果。我们根据IL6R在某些癌细胞表面过表达,而正常细胞没有或极少表达的事实,以hIL6做细胞亲和导向载体,无细胞亲和活性的绿脓杆菌外毒素衍生体PE38为细胞毒性部分,利用重叠延伸PCR技术构建了重组毒素IL6（T22）PE38的基因,在原核表达系统对其进行了表达及细胞活性研究。1.IL6（T22）PE38基因的构建及在巨大芽孢杆菌中的分泌表达。利用重叠延伸PCR技术构建了重组毒素IL6（T22）PE38的基因,将其插入到PHis1525载体的KpnⅠ和NarⅠ多克隆位点间,构建其重组表达载体,然后转化到宿主菌WH320的原生质体中,经细胞壁再生、抗性筛选,诱导重组子表达,重组蛋白在培养基上清中成功获得少量分泌表达,但对SP2/0骨髓瘤细胞无杀伤作用,重组毒素IL6（T22）PE38在巨大芽孢杆菌中表达产物无活性。2.将重组毒素IL6（T22）PE38的基因插入到pET-28a表达载体的NcoⅠ和XhoⅠ多克隆位点间,成功构建了pET-28a-IL6（T22）-PE38重组质粒,分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）、Rosetta blue（DE3）和BL21（DE3）pLysS宿主菌中,经抗性筛选重组子,分别进行IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和薄层扫描分析,重组蛋白在大肠杆菌中以部分可溶的形式表达,在Rosetta blue（DE3）中表达量最高,达到菌体总蛋白含量的15.3 %;三种大肠杆菌重组菌产生的重组毒素均有选择性细胞毒性,可特异性地杀伤U266和SP2/0细胞。同时对三种重组菌的诱导表达条件进行了初步优化,重组毒素IL6（T22）PE38在BL21（DE3）pLysS菌株中表达量最高,可溶性表达量占菌体可溶性蛋白的18.2 %,最佳诱导表达条件为:向培养基中添加IPTG至终浓度1 mmol/L、28℃诱导5 h。体外对U266细胞的LD50大约是8-15 ng/mL。该重组毒素的成功构建及在大肠杆菌中成功表达,为其进一步的研究奠定了基础。