研究背景:烧伤早期心肌受损是导致休克/缺血缺氧及脏器损害的重要因素。烧伤早期发生心肌损害的机制较为复杂,由于应激而激活的神经-体液因素导致的心肌缺氧损害是其重要机制之一。近年来的研究发现,自噬流受损是烧伤早期心肌细胞损害的重要因素,因此深入探讨心肌细胞自噬流受损的机制,对阐明及预防烧伤早期心肌损伤均具有重要意义。生理条件下,自噬可发生于正常细胞,以维持细胞自身日常的物质利用及能量代谢。当自噬受损时,过多的自噬体堆积使细胞能量及物质得不到供应甚至导致细胞毒性。自噬体的清除依靠溶酶体的正常工作,因此溶酶体的功能是影响细胞自噬的关键环节。TPC2是存在于溶酶体膜上的离子通道,可通过NAADP等信号分子调节溶酶体内钙离子释放从而影响溶酶体内环境的稳态,或通过某些与转运分子如STX蛋白家族及Rab蛋白的相互作用参与细胞内囊泡的融合和运输过程,从多个方面影响自噬的进程。本研究旨在探讨缺氧导致TPC2下调介导心肌细胞自噬流受损的作用及其机制。研究方法:1、建立体外常氧及低氧环境培养的SD乳大鼠原代心肌细胞模型以模拟烧伤早期心肌缺血缺氧微环境。观察不同处理时长（1%O₂:6h、9h、12h）的低氧环境对SD乳大鼠心肌细胞自噬的影响与TPC2蛋白表达的变化,探究缺氧对心肌细胞活力的影响。2、通过利用不同浓度的TPC2激活剂NAADP处理低氧环境（1%O₂:9h）下的SD乳大鼠心肌细胞,WB检测心肌细胞自噬的变化,得出最适激活浓度;利用NAADP拮抗剂Ned-19双向调控低氧环境（1%O₂:9h）下的SD乳大鼠心肌细胞,WB检测心肌细胞自噬的改变,CCK8法检测心肌细胞活力;特定的荧光染料处理SD乳大鼠心肌细胞后,免疫荧光检测溶酶体pH值变化,明确缺氧及最适激活浓度NAADP对于缺氧环境下心肌细胞溶酶体的影响。3、通过腺病毒转染技术构建过表达TPC2的SD乳大鼠心肌细胞模型并进行缺氧处理（1%O₂:9h）;WB检测TPC2过表达的有效性。通过特定的荧光染料处理SD乳大鼠心肌细胞,免疫荧光检测不同处理组的溶酶体pH值;最后WB检测各处理组自噬流的变化,CCK8法检测心肌细胞活力。从而证实TPC2在调控心肌细胞自噬过程中可能的机制。结果:1、低氧可导致心肌细胞自噬标记分子LC3-II、P62表达量增多且随时间增加,自噬标记分子的积累量增多,心肌细胞活力下降;TPC2蛋白分子表达量随缺氧时间延长而下调。2、通过NAADP浓度梯度实验确定10μM为激活TPC2的工作浓度;通过TPC2双向调控实验发现,NAADP可改善溶酶体内pH值、细胞自噬流及心肌细胞活力。3、腺病毒转染构建过表达TPC2蛋白结果发现,上调因缺氧下调的TPC2可改善心肌细胞的自噬体累积,并使缺氧后的心肌细胞溶酶体内pH值降低,溶酶体功能改善,细胞活力增强。结论:缺氧导致TPC2蛋白表达量下调,是介导心肌细胞自噬流受损的重要机制。上调TPC2的表达通过降低心肌细胞溶酶体内pH,增强溶酶体酶活性,使自噬流改善,心肌细胞活力增强。这一结果为烧伤早期心肌细胞缺血缺氧的防治提供了新靶点。