CRF高PTH对鼠心肌细胞钙转运、钙电流和钙通道α1GmRNA表达的影响及钙三醇干预的研究

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第一部分 甲状旁腺素对鼠心肌细胞钙转运和细胞凋亡的影响 目的 研究不同浓度甲状旁腺素(PTH)对鼠心肌细胞钙转运、细胞肥大和凋亡的影响及其机制,以及钙三醇的干预作用。 方法 利用培养的新生大鼠心肌细胞,以Fluo-3/AM负载,通过激光共聚焦显微术(LSCM)测定细胞内游离钙浓度([Ca2+]i);以细胞面积和细胞蛋白含量作为心肌细胞肥大指标;采用电镜和流式细胞术观察细胞凋亡的变化。 结果 在细胞外Ca2+为2.5mmol.L-1时,PTH1-34在0、0.01、0.1和1μmo1.L-1浓度下的刺激可使静息心肌细胞钙荧光强度(FI)分别从48.78±6.70、47.78±6.14、45.58±6.11、51.10±9.33,增高至48.82±6.31、54.63±3.60、63.82±9.21(P<0.01)、78.66±10.04(P<0.01);1μmol.L-1浓度PTH1-34刺激,在细胞外液无钙时心肌细胞静息钙FI仅从48.88±7.06上升到55.50±6.52(P>0.05);如应用10μmol.L-1硝苯地平预处理、则FI从47.42±8.80上升到54.12±5.13(P>0.05)。同时,细胞搏动也呈相应趋势的变化。 PTH1-340.01和0.1μmol.L-1刺激7天后,心肌细胞内钙荧光强度、心肌细胞面积和蛋白含量、细胞凋亡率分别为186.0±43.6、287.3±33.7μm2、291.4±21.1pg/cell、6.97±1.00%和217.9±22.2、368.4±51.2μm2、346.0±33.6pg/cell、12.58±1.75%,均较对照组77.7±19.9、218.7±19.9μm2、223.0±13.7pg/cell、0.12±0.11%显著 讪0)、科人。>博卜。川立论又增加一而 0.l[1 1llOI.L叮11二一来激白 同日加入硝本地平 I或 1帅 fllOI.L’,上述指标显著改善,但未能达正常。若以叶fi-;。0.1[l 1llol/L刺激,共同时加入O.O们fi 1ilO/ 白钙二醇 干预上述指标明显降低,分另为门4.3土二 9.9、Z 4三二土 2 0.O [l Ill’、Z 4 3.二士 12.9 9 D g/C Cll、3.一 3 i O.4 0%(八0一 m)二 但厂 时应用 O.ltl 1llOI儿钙三西干预,则无显著改善,分另为 2O7.8士 33.6、364.7土 38.3入fill‘、n1.6土 17.一*/CCll和 1二.19士1.0狐(尸>O.0三)。 结论 ①PTL*可迅速增 加残C4)L去月搏动和鼓a ICa’”h;①PTH-;;持续刺激可显著增加培养。。肌细胞【才”IZ,诱导细胞肥大和凋亡;适宜浓度钙二醇具有保护作用,高浓度钙二醇则无显著保护作用。③阿巴;;诱导的上述变化呈浓度依赖性,L型钙通道开放引起的细胞外钙内流增力。为其机制之一。
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