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目的：随着人们生活水平的提高，高脂高糖饮食已经成为我们的日常饮食。随之而来的非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NALFD)在我国的发病率越来越高，且呈低龄化发病趋势，已经成为严重威胁人类公共健康的主要疾病之一。为此我们拟在体外细胞培养环境下应用高脂高糖调控肝细胞增殖与衰老状况模拟NAFLD的肝细胞病变，为寻找该类疾病有效干预靶点提供基础。 方法：(1)棕榈酸联合葡萄糖作用于BNL CL.2细胞48小时，诱导细胞衰老，检测衰老相关β-半乳糖苷酶，衰老相关蛋白乙酰化P53（Ac-P53）、P21、γH2AX以及细胞周期相关基因CDK4/6、Rb1的表达。(2)实时定量PCR技术检测经棕榈酸和葡萄糖处理24小时后BNL.CL2细胞内miR-34a的表达水平。(3)瞬时转染miR-34a mimics至BNL.CL2细胞，转染48小时后检测衰老相关β-半乳糖苷酶、SIRT1、Ac-P53、P21以及γH2AX蛋白的表达；转染24小时后检测CDK4/6和Rb1 mRNA的表达。(4)瞬时转染miR-34a inhibitor至BNL.CL2细胞，6小时后，棕榈酸联合葡萄糖处理细胞，处理48小时后检测衰老相关β-半乳糖苷酶、SIRT1、Ac-P53以及P21蛋白的表达；处理24小时后检测CDK4/6和Rb1 mRNA的表达。(5)加入SIRT1激动剂白藜芦醇作用于BNL.CL2细胞，8小时后，棕榈酸联合葡萄糖处理细胞，处理48小时后检测衰老相关β-半乳糖苷酶、SIRT1、Ac-P53以及P21蛋白的表达；处理24小时后检测CDK4/6和Rb1 mRNA的表达。(6)瞬时转染p53 siRNA至BNL.CL2细胞，6小时后，棕榈酸联合葡萄糖处理细胞，处理48小时后检测衰老相关β-半乳糖苷酶、SIRT1、Ac-P53以及P21蛋白的表达；处理24小时后检测miR-34a、CDK4/6以及Rb1 mRNA的表达。 结果：(1)体外成功建立肝细胞衰老的细胞模型：①MTT和β-半乳糖苷酶染色结果显示棕榈酸和葡萄糖的浓度分别为50μM和100mM时，细胞增殖潜能衰竭，衰老相关β-半乳糖苷酶表达增加，故而确定为最佳处理浓度；②用棕榈酸和葡萄糖的最佳浓度处理BNL.CL2细胞后，衰老相关蛋白Ac-P53、P21及γH2AX的表达增加，CDK4/6 mRNA表达减少，Rb1 mRNA表达增加。(2)棕榈酸联合葡萄糖处理BNL.CL2细胞后，miR-34a表达水平升高。(3)BNL.CL2细胞瞬时转染miR-34a mimics后，衰老相关β-半乳糖苷酶表达增加，SIRT1蛋白表达减少，Ac-P53、P21及γH2AX蛋白表达增加，CDK4/6 mRNA表达减少，Rb1 mRNA表达增加。(4)建立的肝细胞衰老模型通过miR-34a inhibitor干预后，与衰老模型组相比，衰老相关β-半乳糖苷酶表达减少，SIRT1蛋白表达增加，Ac-P53及P21蛋白表达减少，CDK4/6 mRNA表达增加，Rb1 mRNA表达减少。(5)建立的肝细胞衰老模型通过SIRT1激动剂干预后，与衰老模型组相比，衰老相关β-半乳糖苷酶表达减少，SIRT1蛋白表达增加，Ac-P53及P21蛋白表达减少，CDK4/6 mRNA表达增加，Rb1mRNA表达减少。(6)建立的肝细胞衰老模型通过p53 siRNA干预后，与衰老模型组相比，衰老相关β-半乳糖苷酶表达减少，miR-34a表达减少，SIRT1蛋白表达增加，Ac-P53及P21蛋白表达减少，CDK4/6 mRNA表达增加，Rb1 mRNA表达减少。 结论：高脂、高糖环境下，可诱导肝细胞中miR-34a的高表达，抑制SIRT1的活性，导致P53活性升高，引起细胞周期阻滞，从而诱导肝细胞衰老，而P53可以正反馈作用于miR-34a，进一步促进肝细胞的衰老。