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Flt3配体（Flt3 ligand,FL）是Ⅰ型跨膜糖蛋白,含有两个N型糖基化位点,广泛地表达于机体的各个组织,部分FL还以可溶性形式存在,且两种形式都具有生物学功能。FL蛋白的前1～134位的氨基酸对于维持其生物学活性是必需的。FL通过与Flt3受体作用,增加进入细胞周期的原始祖细胞,促进造血干/祖细胞的增殖和分化,刺激机体的早期造血。FL还可以与其它一些生长因子（如SCF、G-CSF、GM-CSF和IL-3等）协同作用,促进淋巴细胞和髓系细胞的生长。因而FL有利于机体的造血重建,对于造血动员、辐射损伤救治和肿瘤病人的造血功能的恢复具有潜在的临床应用价值。FL最突出的作用是它能在体内显著地上调产生DCs,通过产生不同的DC群体,可以诱导免疫耐受或刺激免疫应答。FL的这些作用使它有可能成为抗肿瘤免疫、抗感染免疫和移植免疫方面具有潜在应用价值的药物。 虽然FL具有重要的临床应用价值,但迄今为止的报道表明其在大肠杆菌系统的表达尚不完备,受到了表达量的限制以及引入较多外源性蛋白,并且生物学活性低下。而在其它系统中的表达量低下,给下游工程带来困难。因而,本实验选取对FL基因进行改造后的合成基因,在大肠杆菌体系中高效地表达了FL功能片段,通过对包涵体变性和复性,应用HiTrapTM柱一步纯化获得了较高纯度的rhFL134重组蛋白。并用经典的集落形成实验和CD34+细胞的扩增实验证实了rhFL134重组蛋白具有显著的生物学活性。本实验为具有生物学活性的rhFL的大规模生产提供了有效的方案,为FL的进一步研究和应用奠定了物质基础。 一、fl134表达载体的构建 以本实验室的合成FL胞外段基因和天然的fl基因为模板,应用PCR技术扩增出对FL蛋白生物学活性至关重要的前134个氨基酸的基因序列（fl134）,克隆入pET30a表达载体,并且在FL的N端引入了一个Met和C端加了Leu和Glu各一个