亮氨酸对猪胎盘滋养层细胞增殖及氨基酸转运的影响

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:majinrao
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为了研究亮氨酸(Leu)通过mTOR信号通路对猪胎盘滋养层细胞增殖以及氨基酸转运载体表达的影响。本试验分别利用MTT法和流式细胞仪检测不同Leu浓度(0、0.1、0.5、1、5、10 mM)处理pTr细胞不同时间(24 h、48 h、72 h)后,对其增殖活力和细胞周期分布的影响。并利用荧光定量PCR检测不同Leu浓度(0、1、10 mM)处理pTr细胞不同时间(24 h、48 h)后,氨基酸转运载体、mTOR信号通路关键蛋白、细胞周期蛋白依赖型激酶CDK4以及凋亡基因Caspase-8 mRNA表达水平的变化。试验结果如下:1、不同浓度Leu处理pTr细胞24 h后,0.5 mM、1 mM组和10 mM组显著提高细胞增殖数目(P<0.05);Leu处理pTr细胞48 h后,所有试验组均极显著的降低细胞数目(P<0.01);Leu处理pTr细胞72h后,1 mM和10 mM亮氨酸试验组极显著降低pTr细胞增殖数目(P<0.01)。2、不同浓度Leu处理pTr细胞24 h和48 h后,各试验组G0-G1期细胞数目逐渐增多,S期细胞数目逐渐减少,并呈时间和剂量依赖性。RT-PCR试验结果表明,随着Leu浓度的增加,CDK4的mRNA相对表达量逐渐降低,且10 mM Leu处理pTr细胞48 h后,差异显著(P<0.05)。3、不同浓度Leu处理pTr细胞24 h和48 h后,细胞凋亡相关基因Caspase-8的mRNA相对表达量与对照组相比差异均不显著(P>0.05)。4、不同浓度Leu处理pTr细胞,1 mM Leu试验组处理pTr细胞24 h后显著降低4E-BP1的mRNA相对表达量(P<0.05),但10 mM试验组与对照组差异不显著(P>0.05);1 mM和10 mM Leu试验组处理pTr细胞48 h后极显著降低4E-BP1的mRNA相对表达量(P<0.01)。1 mM Leu试验组处理pTr细胞24 h后显著降低eIF4G的mRNA相对表达量(P<0.01),但处理48 h后差异不显著(P>0.05)。10 mM Leu试验组处理pTr细胞24 h后,mTOR的mRNA相对表达量极显著地高于对照组和1 mM试验组(P<0.01),48 h后,差异显著(P<0.05)。不同浓度Leu处理pTr细胞24 h和48 h后,S6K1、PKB的mRNA相对表达量与对照组相比,差异均不显著(P>0.05)。5、不同浓度Leu处理pTr细胞后,所有试验组的氨基酸转运载体SNAT1、SNAT2、LAT1、4F2hc、rBAT的mRNA相对表达量相比于对照组均呈现不同程度的降低。其中处理24 h后,除1 mM Leu试验组处理pTr细胞相比于对照组极显著地降低SNAT1的mRNA相对表达量(P<0.01),且显著地低于10 mM Leu试验组(P<0.05)外,所有试验组的氨基酸转运载体SNAT2、LAT1、4F2hc、rBAT的mRNA相对表达量均低于对照组,但差异均不显著(P>0.05)。处理48 h后,1 mM亮氨酸试验组显著降低氨基酸转运载体LAT1的mRNA相对表达量(P<0.05),但对SNAT1、SNAT2、4F2hc、rBAT的mRNA相对表达量无显著影响(P>0.05)。10 mM亮氨酸试验组极显著降低氨基酸转运载体SNAT1、SNAT2、LAT1的mRNA相对表达量(P<0.01),显著降低氨基酸转运载体rBAT的mRNA相对表达量(P<0.05),但对4F2hc的mRNA相对表达量无显著影响(P>0.05)。以上研究结果表明,高浓度Leu通过抑制mTOR信号通路表达,阻碍正常细胞周期,从而抑制pTr的增殖活力,降低pTr细胞氨基酸转运载体mRNA表达。
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