水蛭提取液对酪氨酸蛋白激酶介导的牛视网膜色素上皮细胞跨膜信号转导途径的影响

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目的 研究水蛭提取液对酪氨酸蛋白激酶(PTK)介导的牛视网膜色素上皮(RPE)细胞跨膜信号转导途径的影响。 方法 (1)5种常用方法(醇水双提法、乙醇回流法、水提法、水提醇沉法、渗滤法)制备水蛭提取液,以不同浓度的提取液孵育体外培养的牛RPE细胞24小时,MTT法测OD值,计算抑制率。筛选抑制作用较好的提取方法和浓度。 (2)不同浓度血小板源性生长因子(PDGF)孵育牛RPE细胞24小时,测OD值,计算增殖率。筛选最佳浓度。 (3)16mg/ml水蛭渗滤液与0.02ug/ml PDGF以3种不同加药方式(先加中药水蛭后加PDGF,先加PDGF后加中药水蛭,中药水蛭与PDGF同时加)分别作用于牛RPE细胞15分钟后,采用免疫沉淀,SDS-PAGE电泳,Western-blot检测细胞内转录因子STAT3的磷酸化水平。 结果 (1)16mg/ml水蛭渗滤液对体外培养的牛RPE细胞增殖的抑制效果显著(p<0.05),且较为安全、稳定。 (2)0.02ug/ml PDGF溶液能显著促进牛RPE细胞增殖(p<0.05)。 (3)16mg/ml水蛭渗滤液3种加药方式下均能不同程度抑制细胞内PTK活性,降低转录因子STAT3的磷酸化水平。 结论
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