FGF23与SUMO融合蛋白在大肠杆菌中高效表达及其纯化的研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qingxu007
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成纤维细胞生长因子(FGF)是一类来源于中胚层和神经外胚层的多种类型的具有广泛生物活性的细胞生长因子。到目前为止,发现FGFs超家族共有23个成员。成纤维细胞生长因子23,是成纤维细胞生长因子超家族中19亚家族的一员,也是最新发现的,它是磷、维他命D与甲状旁腺素的重要调节因子。血液中的FGF23主要是由成骨细胞产生的,它能远距离调节肾脏中的物质代谢,具有内分泌激素的特征,这一点使其区别于其他大多数成纤维细胞生长因子。目的:将成纤维生长因子23(FGF23)的核心区与小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)融合并转入大肠杆菌Rosetta中进行高效表达,目的是获得大量可溶的FGF23蛋白。方法:采用PCR扩增的方法,获得编码SUMO-FGF23core的DNA片段。将该片断插入表达载体pET22b中,构建了重组表达菌株pET22b-SUMO-FGF23core并转化入大肠杆菌Rosetta中。利用IPTG进行诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析的方法分离纯化融合蛋白pET22b-SUMO-FGF23core。采用SUMO酶酶切融合蛋白后,并对纯化后的蛋白进行Western blotting分析。结果:所构建的表达菌株,在37℃条件下,其中ROSETTA/pET22b-SUMO-FGF23融合蛋白表达量可达50%,但是可溶性很低;30℃时可溶性也低一些;但在25℃诱导24h,其表达量约为菌体总蛋白的40%; pET22b-FGF23融合蛋白获得大量表达,总结所有的结果得到融合蛋白的最佳表达条件为当OD600=0.8时(约诱前3h),加入0.5mMIPTG,25℃诱导24h,经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了纯度达90%以上的FGF23。讨论:通过融合表达,解决了FGF23独立表达时表达量低和可溶性差的问题,使其商业化的步伐进一步加快。但受实验条件和时间的限制,本研究仅对pET22b-SUMO-FGF23的表达和纯化进行了初步的研究,发酵条件的优化有待进一步的探讨研究。
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