喜树组织培养体系建立的研究

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喜树(Camptotheca acuminata)是珙桐科(Nyssaceae)的一种落叶阔叶树,为优良的园林绿化树种,喜树还可以产生具有抗肿瘤作用的喜树碱.本文以喜树(Camptohteca acuminata.)为材料,建立了带芽茎段的快速繁殖体系、子叶节的快速繁殖体系以及愈伤组织培养体系,为喜树碱高产株系的优株快繁,喜树愈伤组织细胞悬浮培养,及喜树遗传转化研究奠定基础.带芽茎段快速繁殖体系:以成年喜树带芽茎段为外植体,采用75%酒精浸泡30sec,0.1%HgCl<,2>+数滴Tween20灭菌10min表面消毒方法能较好的控制微生物的污染.以MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.5mg/L为腋芽诱导培养基,腋芽萌发率高,达75%以上,20d腋芽伸长到1.5cm左右.MS+6-BA0.5mg/L上诱导丛生芽,20d后得到8个芽/1个腋芽.子叶节快速繁殖体系:以7d龄的无菌苗子叶节胚芽区域为外植体,以NN<,69>附加6-BA(0.2mg/l),IBA(0.05mg/l),AS(afenine sulfate,10mg/l)的培养基对丛生芽的诱导与增值效果最佳.愈伤组织培养体系:子叶、幼叶、胚轴均可诱导愈伤组织,但诱导愈伤组织的诱导率,出愈时间以下胚轴优于子叶,子叶优于幼叶.在光照培养条件下,培养在MS+2mg/LNAA+0.25mg/L6-BA+0.2mg/L2,4-D培养基上的愈伤组织生长较快,20d培养的愈伤组织生长速率为1121%,在黑暗培养条件下,愈伤组织生长最佳培养基为MS+NAA4mg/L+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.6mg/L.愈伤组织生长适宜的蔗糖浓度为20-30g/L,最适生长PH为5.8-6.2.下胚轴来源的愈伤组织在分化培养基NN<,69>+6-BA0.2 mg/L+IBA0.1 mg/L+AS10mg/L上分化出芽,分化率为90%以上.丛生芽在MS附加0.5mg/L的6-BA的培养基上增殖,每20d在原培养基以8个芽/单芽的速度增殖.单芽的壮芽培养基为:B5+0.56-B A mg/L+KT0.1 mg/L.生根培养基为B5+IBA 0.5 mg/L+KT0.1 mg/L+AS 10 mg/L.生根率率达90%.
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