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本论文以里氏木霉(Trichoderma reesei)RUT C30为纤维素酶生产菌种,研究了针叶材纸浆对合成纤维素酶的促进作用,并对自产酶工业应用的相关技术进行了初步探究。主要结果如下:以纸浆和稀酸处理纸浆为混合碳源,采用间歇发酵生产纤维素酶,当纸浆浓度为4 g纤维素/L,稀酸处理纸浆浓度为8 g纤维素/L时,滤纸酶活最高达到2.78 FPU/mL,β-葡萄糖苷酶活达到1.26 U/mL。采用分批补料生产纤维素酶,起始碳源是纸浆,纤维素浓度为8 g/L,当每天补加纤维素浓度为6 g/L的稀酸处理纸浆时,滤纸酶活最高达到9.78FPU/mL,β-葡萄糖苷酶活达到1.72 U/mL。合理搭配使用纸浆和稀酸处理纸浆,纤维素酶的产率可以得到大幅度的提高。在分批补料的基础上进行间歇出酶的研究。每隔24 h出酶、出酶15%,每隔48 h出酶、出酶30%,每隔72 h出酶、出酶45%,实验结果差异较大,出酶间隔时间和出酶量对纤维素酶生产的影响较大。当从产酶第4天开始每24 h出酶量为15%时产酶结果最佳,发酵8天后总滤纸酶活为689.10 FPU,总的β-葡萄糖苷酶活为170.38 U,总酶活提高率分别为40.9%和98.1%。为了避免杂菌的感染,部分菌丝体也可以随着酶液不进行回收。每天取出等量的酶液和菌丝体,改变每次出酶出菌量分别为10%、12.5%、15%、17.5%和20%,总滤纸酶活提高率在37%-43%之间,而β-葡萄糖苷酶总酶活提高率在66%-100%之间。当每天取出15%的酶液和菌丝体时,总滤纸酶活为698.98 FPU,总酶活提高率为42.9%,β-葡萄糖苷酶总酶活为171.03 U,总酶活提高率为98.8%,纤维素酶的体积产率为45.51 FPU/(L·h),纤维素酶得率为279.59 FPU/g纤维素,发酵过程中菌丝体浓度维持在4-5 g/L之间。这种培养方法不仅可以提高纤维素酶的生产效率,还可以减少多余的真菌细胞对碳氮源的消耗。以酸爆玉米秸秆为纤维素酶水解底物,底物浓度为50 g/L,分批补料所产纤维素酶酶水解48 h后酶水解得率为85.9%,间歇出酶和出菌丝的酶水解得率分别为89.4%和87.5%,结果表明出酶出菌丝不会影响酶的水解能力。用膜孔径为10 kDa的中空纤维筒滤膜对自产纤维素酶进行超滤浓缩,结果发现,滤纸酶活和β-葡萄糖苷酶活剩余率与浓缩比例呈负相关。对自产纤维素酶储存80天,发现滤纸酶活和β-葡萄糖苷酶活呈现先上升后下降的变化趋势,在第7天酶活达到了最高峰值,最终滤纸酶活保存率在80%以上,β-葡萄糖苷酶活保存率在87%以上。实验结果表明,超滤浓缩和低温保存适合工业使用。