小亚细亚绒鼠、长尾大麝鼩和灰麝鼩肉孢子虫的形态学、生活史和分子系统学研究

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在安宁市农田生境捕获了12只小亚细亚绒鼠(Eothenomys miletus)、6只长尾大麝鼩(Crocidura fuliginosa)和7只灰麝鼩(C.attenuate),利用光学显微镜、电子显微镜、分子生物学及实验动物感染等方法,对寄生于上述野生动物的肉孢子虫的自然感染率、包囊形态、分子系统进化及生活史等方面进行了研究。小亚细亚绒鼠的肉孢子虫自然感染率为75%(9/12),共发现2种肉孢子虫:(?)肉孢子虫(Sarcocystis clethrionomyelaphis)(100%,9/9)及小亚细亚绒鼠肉孢子虫新种(S. miletus n.sp.)(33.33%,3/9)。(?)肉孢子虫包囊光镜下具倾斜指状突起,突起长度为6.40-2.89μm;电镜下包囊呈指状突起,基质层厚0.6-1.0μm,突起和基质层表面有许多小凹陷,内有大量致密电子颗粒,突起内无微管及纤维丝。小亚细亚绒鼠肉孢子虫新种光镜下包囊壁光滑;电镜下包囊壁具不规则小突起,内有大量致密电子颗粒,无微管及纤维丝,基质层厚度为0.6-0.8μm。将含有(?)肉孢子虫包囊的小亚细亚绒鼠肌肉饲喂给1条黑眉锦蛇(Elaphe taeniura)。感染50天后在黑眉锦蛇粪便内发现了孢子化的卵囊和孢子囊,卵囊平均大小为15.37×11.38μm(n=9),孢子囊平均大小为7.15×10.06μm(n=4);感染87天后将黑眉锦蛇处死,在其肠粘膜细胞中发现了孢子化的卵囊和孢子囊,形态大小与在粪便内发现的一致。长尾大麝鼩和灰麝鼩肉孢子虫的自然感染率为15.38%(2/13)。共发现1种肉孢子虫:肉孢子虫未定种(Sarcocystis sp.);长尾大麝鼩的感染率为16.67%(1/6);灰麝鼩的感染率为14.29%(1/7)。光镜下包囊表面具短指状突起,突起长度为4.51-3.43μm电镜下包囊表面具短指状突起,包囊壁下方具基质层,厚度为0.6-1.1μm,突起和基质层表面有许多连续的小凹陷,内有大量致密电子颗粒,突起内无微管及纤维丝。用酚-氯仿法提取(?)肉孢子虫、小亚细亚绒鼠肉孢子虫新种、长尾大麝鼩源及灰麝鼩源肉孢子虫的包囊和(?)肉孢子虫的卵囊与孢子囊的总DNA, PCR扩增18SrRNA基因得到1700bp左右的片段,利用MEGA5.0中的NJ法、ME法构建系统树。系统树的拓扑结构显示,小亚细亚绒鼠肉孢子虫新种与以毒蛇为终末宿主的S. nesbitti、蝰蛇肉孢子虫(S. atheridis)和肉孢子虫未定种(Sarcocystis sp. AF513491)聚成一枝,推测其终末宿主可能为毒蛇类;长尾大麝鼩源肉孢子虫未定种(Sarcocystis sp.1)、灰麝鼩源肉孢子虫未定种(Sarcocystis sp.2)、(?)肉孢子虫与以无毒蛇为终末宿主的新加坡肉孢子虫(S. singaporensis)、肉孢子虫未定种(Sarcocystis sp. KC201639)、肉孢子虫未定种(Sarcocystis sp. AB251613)及左氏肉孢子虫(S. zuoi)聚成一枝,推测其终末宿主可能为无毒蛇类。(?)肉孢子虫包囊、卵囊18S rRNA基因序列分析,利用Pst Ⅰ、EcoRⅠ及Sac Ⅱ进行PCR-RFLP酶切图谱亦支持黑眉锦蛇是(?)肉孢子虫合适的终末宿主。
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