【摘 要】
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目的:通过不同浓度低氘水（deuterium depleted water,DDW）作用于人卵巢癌SKOV3细胞,观察其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并初步探索其可能作用机制,寻找DDW能成为卵巢癌治疗佐剂的科学依据。方法:1.体外培养SKOV3细胞,设置成4组,实验组使用氘含量为125pp m,75ppm,25ppm的DDW配置的培养基,对照组使用氘含量为150pp m的三
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目的:通过不同浓度低氘水（deuterium depleted water,DDW）作用于人卵巢癌SKOV3细胞,观察其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并初步探索其可能作用机制,寻找DDW能成为卵巢癌治疗佐剂的科学依据。方法:1.体外培养SKOV3细胞,设置成4组,实验组使用氘含量为125pp m,75ppm,25ppm的DDW配置的培养基,对照组使用氘含量为150pp m的三蒸水配置的培养基。2.采用克隆形成实验、CCK8法测定DDW作用24、48、72、96小时对SKOV3细胞增殖能力的影响。3.采用Transwell迁移实验、划痕修复实验观察DDW对SKOV3细胞迁移能力的影响。4.采用Transwell侵袭实验观察DDW对SKOV3细胞侵袭能力的影响。5.采用Western blot法检测DDW对SKOV3细胞中基质金属蛋白酶9（matrix metallo protein 9,MMP-9）及波形蛋白（vimentin,VIM）分泌量的影响。结果:1.克隆形成实验结果显示,对照组克隆细胞数明显多于实验组,且实验组克隆细胞数随着培养基中氘浓度的下降而下降,但经统计学软件分析后,各实验组与对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）;比较各实验组间克隆细胞数发现,25ppm与75ppm组差异有统计学意义（P<0.05）。CCK8实验结果提示,在培养24小时后,25ppm组与对照组细胞存活率差异有统计学意义（P<0.05）,75ppm、125pppm组与对照组细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。在培养48小时后,各实验组与对照组细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。但在培养72、96小时后,25ppm、75ppm组细胞存活率反而超过对照组细胞存活率,且差异有统计学意义（P<0.05）,125ppm组与对照组相比无统计学差异（P>0.05）。2.Transwell迁移实验发现,经DDW处理后的各实验组（125ppm,75ppm,25ppm）细胞与对照组相比,由上室迁移进入下室的细胞数量明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）;随着DDW中氘浓度的下降,进入下室的细胞逐渐减少,呈剂量依赖性,具有统计学意义（P<0.05）。划痕修复实验结果显示,DDW干预组（125ppm,75ppm,25ppm）与对照组相比,细胞愈合的面积明显减小,差异有统计学意义（P<0.05）;随着DDW中氘浓度的下降,愈合的面积逐渐减小,呈剂量依赖性,有统计学意义（P<0.05）。3.Transwell侵袭实验发现,与对照组相比,实验各组（125ppm,75ppm,25ppm）由上室迁移进入下室的细胞数量明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）;随着DDW中氘浓度的下降,进入下室的细胞逐渐减少,呈剂量依赖性,具有统计学意义（P<0.05）。4.Western blot法检测结果提示,在不同浓度（125ppm,75ppm,25ppm）DDW作用下,各实验组SKOV3细胞MMP-9和VIM蛋白含量均有不同程度的下降,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;随着氘浓度下降,蛋白含量持续下降,呈剂量依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1.DDW对SKOV3细胞的迁移和侵袭有显著的抑制作用,并呈浓度依赖性。2.DDW抑制卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭的机制可能与下调MMP-9和VIM表达、逆转上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）进程有关。3.DDW对卵巢癌SKOV3细胞增殖能力的影响尚不明确,有待进一步探讨。
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