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目的:胰腺癌（PC）由于缺乏有效的辅助治疗手段,目前对胰腺癌的治疗均首选高质量的手术切除,但手术治疗难度高且并不能根治胰腺癌进而提高患者的生存质量,因此急需我们更深入地探索胰腺癌更多、更有效的治疗靶点。在本部分研究中,我们主要探讨在胰腺癌中筛选并鉴定与铁死亡相关的环状RNA。方法:通过铁死亡诱导剂erastin构建不同程度的铁死亡水平,在CCK-8实验下得到erastin最佳作用时间及其在不同胰腺癌细胞中作用的IC50;在此基础上通过全转录组测序,筛选出胰腺癌中与铁死亡相关的环状RNA;运用实时荧光定量聚合酶链（RT-qPCR）反应检测10个显著差异的环状RNA,筛选出其中最具有代表性的环状RNA以进行后续的研究。利用Sanger测序RNase R实验验证circ0003 502的环状结构,利用亚细胞分离实验和FISH实验对circ0003502进行亚细胞定位。结果:前期CCK-8实验结果显示,铁死亡诱导剂erastin在胰腺癌中作用的最佳时间为24h;IC50大致为20μM,并利用SYTOX细胞死亡实验进行进一步的验证。随后通过环状RNA测序得到最具有显著差异的10个环状RNA;RT-qPCR结果显示circ0003502具有更为明显的差异性（P＜0.05）;circ0003502在胰腺癌组织和细胞系中显著高表达（P＜0.05）。此外,临床病理资料显示circ0003502与肿瘤直径大小和肿瘤分化等特征密切相关（P＜0.05）。结论:Circ＿0003502与铁死亡诱导剂erastin所诱导的胰腺癌铁死亡明显相关,值得进一步深入探究。目的:在本部分研究中,我们主要探讨circ0003502对胰腺癌铁死亡水平和增殖水平的影响。方法:分别在胰腺癌细胞中构建过表达和敲低circ0003502组,以及两者的阴性对照组。RT-qPCR测定转染的效率,并分别检测在无胱氨酸培养基中培养,加入铁死亡诱导剂或抑制剂后circ0003502的表达水平变化。在CCK-8实验的辅助下,对各组的IC50进行评估比较,并且通过SYTOX实验进一步证实。随后在各个组别中测定铁死亡相关的指标,包括Fe2+、MDA以及ROS的水平来探究circ0003 502表达水平对胰腺癌细胞铁死亡水平的影响。最后分别进行CCK-8实验、平板克隆实验以及EdU实验以反应不同表达的circ0003502对胰腺癌细胞增殖能力的影响。结果:前期RT-qPCR实验结果显示已经成功转染并且构建了稳定转染的细胞系,在无胱氨酸培养基中培养一定时间或者加入铁死亡诱导剂/抑制剂后circ0003 5 02的表达水平均出现不同程度的改变,意味着circ0003502可能与铁死亡水平相关（P＜0.05）。随后CCK-8实验探究erastin在各组的胰腺癌细胞中的IC50,结果显示高表达的circ0003502组IC50相较于对照组更高,低表达组IC50则更低,而且此种作用可以被铁死亡的诱导剂或者抑制剂所逆转（P＜0.05）。若是上调circ0003502的表达水平,胰腺癌细胞中Fe2+、MDA和ROS水平均下降,而敲低circ 0003502的表达则会出现相反的结果（P＜0.05）。最后通过CCK-8实验、平板克隆实验以及EdU实验检测各组细胞增殖能力,结果显示circ0003502过表达组具有更高的活力,其克隆形成数及EdU阳性的细胞明显增多了;于此同时,敲低circ0003502则会使细胞活力降低。有趣的是,这种结果在加入铁死亡诱导剂或抑制剂后能够得到明显的缓解（P＜0.05）。结论:Circ＿0003502能够影响胰腺癌细胞的铁死亡水平,进而调控其增殖能力。目的:在本部分研究中,我们主要探究circ0003502影响胰腺癌铁死亡水平并促进胰腺癌细胞增殖的潜在机制。方法:通过数据库发现在circ0003502上存在miRNA反应原件,并筛选出最有可能结合的miRNA,进行PCR检测确定哪一miRNA适合作为研究对象。在线数据库和PCR实验检测组织内miR-654-3p在胰腺癌组织的表达,皮尔森曲线示意其与circ0003502之间的相关性;随后,通过双荧光素酶报告实验和RIP实验等证实二者之间的结合关系及结合位点。在各个分组中测定Fe2+、MDA以及ROS的水平,并对各组细胞中erastin的IC50进行记录;此外,通过CCK-8实验、平板克隆实验以及EdU实验评估细胞的增殖能力。在上述的基础上,筛选出miR-654-3p在胰腺癌细胞中与铁死亡相关的靶基因,通过PCR和western blot实验验证SLC7A11成为靶基因的可能,并在荧光素酶报告实验等辅助下进一步证实。最后,同样测定各组细胞的IC50、Fe2+、MDA以及ROS等指标,并在最后的功能实验中评估细胞的增殖活力。结果:前期在线数据库及RT-qPCR结果显示miR-654-3p为最佳研究对象,该miRNA在胰腺癌组织中低表达,且与circ0003502呈负相关;双荧光素酶报告实验等证实miR-654-3p与circ0003502确实存在结合位点。铁死亡的相关研究显示miR-654-3p模拟物能够缓解circ0003 502过表达导致的Fe2+、MDA以及ROS等指标水平降低以及IC50数值的升高;而miR-654-3p抑制剂则能拮抗敲低circ0003502所造成的效应（P＜0.05）。此外,增殖相关的实验,如平板克隆实验和EdU等显示在过表达circ0003 502的基础上加入miR-654-3 p模拟物相较于过表达circ0003502组,能够使得过表达circ0003502所增强的增殖能力失效,而miR-654-3p抑制剂则出现相反的结果（P＜0.05）。进一步,我们筛选出miR-654-3p的下游靶基因SLC7A11,在PCR和western blot实验中验证SLC7A11基因的RNA和蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告实验等测定miR-654-3p与SLC7A11之间的结合。为了检测SLC7A11与circ0003502和miR-654-3p之间的关系,构建不同的分组,结果显示过表达SLC7A11能够回复si-circ0003502或miR-654-3p模拟物所产生的效应,使细胞的IC50数值上升,Fe2+、MDA以及ROS等铁死亡相关指标则下降,并且增强细胞的增殖能力,让细胞克隆形成数和EdU阳性的细胞数增多（P＜0.05）。结论:铁死亡相关circ0003502通过miR-654-3p/SLC7A1 1轴介导了胰腺癌中的铁死亡抵抗,促进了癌细胞的增殖能力。