蜂花粉多酚对非酒精性肝脏损伤和DSS诱导的结肠炎保护作用研究

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蜂花粉富含多种营养成分,其中多酚是主要生物活性物质之一。蜂花粉多酚具有较强的抗氧化活性,对氧化应激引起的损伤有一定的预防作用,因此蜂花粉作为外源性抗氧化剂逐渐被人们关注。本文对软枣猕猴桃蜂花粉、五味子蜂花粉及油菜蜂花粉中的多酚进行分析,并研究了其对氧化应激引起的细胞损伤的保护作用、对高脂饮食小鼠NAFLD的预防作用及对DSS诱导的小鼠结肠炎的缓解作用,表明蜂花粉多酚可有效预防非酒精性肝脏损伤和DSS结肠炎。1. 观察了软枣猕猴桃蜂花粉孢子的结构,分析了四种提取方法(A.水超声提取B.水热回流C.乙醇超声提取D.乙醇热回流)获得提取物的多酚组成并比较了其提取率。还测定了总酚、总黄酮含量,抗氧化活性(FRAP、络合力和DPPH×清除活性)。最后,研究了其对氧化应激引起的DNA损伤和淋巴细胞损伤的保护作用。结果表明,该蜂花粉孢子形态与猕猴桃属的其他花粉略有差异,乙醇超声提取的软枣猕猴桃蜂花粉含有最高的总酚含量(15.05±0.34 mg GAE/g),具有较强的亚铁离子络合能力(0.37±0.023 mg Na2EDTA/g)、DPPH×清除力(IC50=0.14±0.04 mg/m L)和FRAP(7.13±0.33 mg Trolox/g),对氧化应激引起的DNA损伤及小鼠淋巴细胞具有很强的保护作用。2. 通过UHPLC-Q-Orbitrap-HRMS/HPLC-DAD-ECD分析了五味子蜂花粉提取物(SCPE)中的多酚组成,通过Q-PCR测定与高脂饮食小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)形成相关的基因,探寻SCPE抑制NAFLD形成的相关机理,通过对小鼠粪便中总DNA进行16Sr RNA基因测序,检测肠道微生物多样性,以探究SCPE抑制NAFLD形成的过程中肠道微生物可能发挥的作用。结果表明,鉴定出的12种多酚中柚皮素(1.89 mg/g)、芦丁和白杨素是主要成分。通过给高脂饮食小鼠分别灌胃7.86 g/kg BW和15.72 g/kg BW的SCPE,小鼠体重、肝脏指数和空腹血糖均显著降低,肝脏AST和ALT活性显著降低,血清TG、LDL-C和肝脏TC、TG含量显著降低,由高脂饮食引起的慢性代谢性炎症基因(IL-6,IL-1β,TNF-α、i NOS,NF-κB)的表达减弱,氧化应激减轻。肝脏和附睾脂肪HE染色结果证实高脂饮食引起的NAFLD在灌胃SCPE后得到了很好的抑制。SCPE通过降低高脂饮食引起的肝脏LXR-α、SREBP-1c和FAS基因的表达,抑制NAFLD的形成。此外SCPE可以通过增加高脂饮食小鼠肠道的乳杆菌属,改善肠道健康。3. 通过HPLC-DAD-ECD分析了油菜蜂花粉提取物(RPE)中的多酚组成,通过Q-PCR测定与葡聚糖硫酸钠诱导的C57BL/6小鼠结肠炎相关的基因的表达,探究RPE抑制急性结肠炎的相关作用机理,此外还通过对小鼠肠道内容物中总DNA进行16Sr RNA基因测序检测肠道微生物多样性,研究分析了RPE干预小鼠结肠炎后肠道微生物的变化,以探讨肠道微生物在此过程中发挥的作用。结果表明,在RPE中初步鉴定出的7种多酚中山萘酚的含量最高(19.87 mg/g),其次是芥子酸和迷迭香酸。10.6 g/kg BW和21.2 g/kg BW的提取物有效改善了DSS引起的结肠缩短、脾肿胀和结肠重量减轻;增强了SOD和GSH-Px活性,抑制了MPO活性;抑制了结肠炎相关炎症基因(i NOS,NF-κB,IL-1β,IL-6)的表达,其中,21.2 g/kg BW的RPE实验组相较模型组IL-1β的表达显著下调,约达90%。结肠组织HE染色结果证实RPE有效缓解了结肠炎引起的结肠绒毛和腺体等组织损伤。另外,RPE还通过调节Allobaculum、Bacteroide、Lactobacillus等的相对丰度改善了肠道微生物组成,缓解了DSS诱导的结肠炎。
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