【摘 要】
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目的:本研究旨在探讨钴铬（cobalt–chromium,Co Cr）合金支架腐蚀产物对人主动脉内皮细胞的影响,为心血管支架在体内不良反应提供理论基础和参考意义,建立更为完善的临床方案和诊疗标准。方法:（1）通过文献筛选出Co Cr纳米粒子（NPs）模拟Co Cr合金支架腐蚀产物,并使用人主动脉内皮细胞模拟血管内膜。（2）通过查阅文献,确定使用超纯水配制浓度为2mg/m L的Co Cr NPs混悬
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目的:本研究旨在探讨钴铬（cobalt–chromium,Co Cr）合金支架腐蚀产物对人主动脉内皮细胞的影响,为心血管支架在体内不良反应提供理论基础和参考意义,建立更为完善的临床方案和诊疗标准。方法:（1）通过文献筛选出Co Cr纳米粒子（NPs）模拟Co Cr合金支架腐蚀产物,并使用人主动脉内皮细胞模拟血管内膜。（2）通过查阅文献,确定使用超纯水配制浓度为2mg/m L的Co Cr NPs混悬液,并使用F-12K培养基（含10%胎牛血清）配制Co Cr NPs混悬液的具体实验浓度。为防止纳米粒子聚集,每次使用前超声破碎15分钟。（3）应用扫描投射电镜技术观察纳米粒子的表征,拍摄超过100个纳米粒子,使用Image J计算平均粒径。（4）应用粒度仪测量纳米粒子在水中的水动力学直径和Zeta电位,应用粒度仪测量纳米粒子在含10%胎牛血清的F-12K培养基中48小时后的水动力学直径和Zeta单位。（5）将人主动脉内皮细胞暴露于Co Cr纳米粒子不同时间后,应用扫描投射电镜技术观察纳米粒子是否内化入人主动脉内皮细胞。（6）将处于对数期的人主动脉内皮细胞暴露于不同浓度（0-200μg/ml）的Co Cr NPs混悬液后,继续共培养不同时间（0-48小时）。（7）分别应用CCK-8试剂盒和LDH试剂盒检测细胞活力的变化和细胞膜的破裂情况。（8）Western blot技术检测细胞中凋亡相关蛋白caspase3,PARP,Bax和Bcl-2的表达变化,采用Annexin V-FIIC/PI实验进一步评估细胞的凋亡情况。（9）Western blot技术检测细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP及caspase12的表达变化。（10）通过Western blot技术检测内皮细胞粘附分子ICAM-1,VCAM-1的表达变化,应用粘附实验进一步检测细胞粘附能力的变化。（11）通过Western blot技术检测细胞中炎症因子IL6,IL-1β及TNF-α的表达变化。结果:（1）Co Cr纳米粒子为近球形,平均粒径为46±27nm。在水中的水动力学直径为139?±?20nm,Zeta电位为-0.106V。加入培养基48小时后,其水动力学直径为597±?272nm,Zeta电位为-0.131V。（2）Co Cr纳米粒子可通过内吞作用进入人主动脉内皮细胞。（3）暴露于Co Cr纳米粒子后,主动脉内皮细胞的活力以时间依赖性和浓度依赖性的方式下降。（4）Co Cr纳米粒子以时间依赖性的方式促进人主动脉内皮细胞的细胞膜破裂。（5）Co Cr纳米粒子通过内质网应激凋亡途径促进人主动脉内皮细胞凋亡。（6）暴露于Co Cr纳米粒子后,主动脉内皮细胞粘附分子表达以时间依赖性的方式增加,粘附能力增强。（7）露于Co Cr纳米粒子后,主动脉内皮细胞炎症因子表达以时间依赖性的方式增加。结论:Co Cr纳米粒子通过内吞作用进入人主动脉内皮细胞,导致细胞膜破裂,激活内质网应激,促进细胞凋亡,并诱导细胞中粘附分子和炎症因子的表达。研究结果表明,Co Cr合金腐蚀产物有可能通过导致内皮功能障碍和促进内皮细胞分泌粘附分子和炎症因子的方式导致ISR的发生。
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