胸膜肺炎放线杆菌apxⅠA基因的克隆、表达及免疫原性研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:reg8c4user
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为研究ApxⅠ毒素的免疫活性,本试验参照胸膜肺炎放线杆菌血清10型apxⅠA基因核酸序列(D16582)设计一对引物,利用PCR自该菌株基因组DNA中扩增出3158bp的apxⅠA基因片段,经克隆和序列测定后转入原核表达载体pET-32a中,通过转化BL21(DE3)并在IPTG诱导下进行原核表达,SDS-PAGE和Westernblotting鉴定结果显示表达蛋白大小约120kDa,且表达蛋白可与该菌株免疫兔血清发生结合反应。将apxⅠA表达蛋白与apxⅠAN和apxⅠAC表达的蛋白同时纯化,并从APP血清10型菌体中提取天然ApxⅠ毒素,将四种蛋白分别和等量佐剂乳化后免疫小鼠,其间用间接ELISA方法检测抗体效价。在免疫三次后,分别用5×LD50的APP血清1型和APP血清10型野生菌株对小鼠进行攻毒,结果显示apxⅠA表达蛋白具有与提取的天然ApxⅠ毒素同样的保护力,虽然apxⅠAN表达蛋白免疫保护力低于全蛋白,但显著高于apxⅠAC表达蛋白,提示apxⅠA-N端含有主要的免疫保护位点。本试验为建立APP诊断方法及亚单位疫苗奠定了基础。
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